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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » HeLa细胞传代后90% 死亡，求解
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挫人小鱼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 梦幻未碎 at 2013-09-29 17:01:58
亲！细胞消化只要肉眼可见培养瓶底部细胞脱落就可以加培养基进行轻柔吹打，一般消化在1~2min，具体以观察为准。消化8分钟居然还能有10％活细胞真的是奇迹了。。。。
培养液里面有没有脏脏的感觉？

培养基貌似有些小脏脏。我这次消化细胞，1-2min吧，然后细胞成块滑动，是不是又消化过了。
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11楼2013-10-07 17:44:44
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挫人小鱼

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 超然渡陈 at 2013-09-30 14:09:30
传代后状态不好或者死的一般就四个原因：1.接触细胞的液体温度过低2.胰酶浓度过高或者消化时间过长3.吹打分散时力度过大或吹打时间过长4.细胞污染。你的DMEM培养基从4℃冰箱拿出来之后有没有经过温箱复温？一般在换 ...

嗯，以后会注意一下。
传代前没有提前把PBS，胰酶，培养基放在37摄氏度温箱，我是中瓶转大瓶，中瓶里面胰酶是2ml，加入20ml培养基。
胰酶是买的，他们一般是小瓶1ml中瓶2ml，大瓶2.5ml这么加的。
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12楼2013-10-07 17:50:22
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lavander1006

新虫 (初入文坛)
细胞培养操作是最容易的，要了解细胞的生长周期以及该细胞相关知识是比较难得。出现楼主这种现象原因很多，主要可从三方面考虑：第一，养细胞就像养小孩一样，必须细心、耐心。举例，80岁的老人他是没有生育能力的，细胞只有在年轻的时候（增殖期）才能繁育出好的后代，细胞本应该在最合适的时机进行传代工作，但是您错过了这个机会，造成细胞大面积死亡；第二，新鲜配制的培养液各种成分不是自己制备，很多不可控制的因素可能是一种原因；第三，整体培养环境出现问题，譬如细胞是在5-6%的二氧化碳环境下生长，细胞瓶盖是否关的太严实，造成培养液不能充分的接触二氧化碳。
本人认为第一条是造成您细胞大面积死亡的主要原因。
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13楼2013-10-11 18:24:00
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