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HeLa细胞传代后90% 死亡，求解
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本人菜鸟，才开始学养细胞。 替别人传 细胞，结果HeLa细胞状态好，长的太快，本是第二天下午传的，结果没时间，第三天中午传的。因为细胞长的很满，不过也有很多死细胞，就一个大瓶传了一个中瓶，两个大瓶。镜检，三个瓶子中细胞浓度很大。根据以前的经验，长一天绝对很满。结果第四天早上，也就是今天早晨看的时候，90%的细胞飘起来了，只有10%细胞贴壁生长，而且状态不好。 这次的培养基是新配的，初步认为可能是新配置的培养基没有混合均匀，因为我加入FBS和双抗之后，只是左右晃动几下培养基，10min之后开始用这个培养基（配置培养基后才开始消化细胞），不知道是不是这个原因。 双抗是找别人借的，人家说浓度是100 X 的。DMEM是新的，FBS是用过的，冰箱放置了约3天吧。 其次是前天传了一批自己养的HeLa细胞，培养基是以前的，昨天看还是可以的，死细胞不多，只是贴壁细胞不多，但是今天早上看的时候，也是很多死细胞，状态不好，不知道什么原因。 不知道是不是污染导致这些细胞离我而去？求大侠们解答。 |
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细胞培养操作是最容易的，要了解细胞的生长周期以及该细胞相关知识是比较难得。出现楼主这种现象原因很多，主要可从三方面考虑：第一，养细胞就像养小孩一样，必须细心、耐心。举例，80岁的老人他是没有生育能力的，细胞只有在年轻的时候（增殖期）才能繁育出好的后代，细胞本应该在最合适的时机进行传代工作，但是您错过了这个机会，造成细胞大面积死亡；第二，新鲜配制的培养液各种成分不是自己制备，很多不可控制的因素可能是一种原因；第三，整体培养环境出现问题，譬如细胞是在5-6%的二氧化碳环境下生长，细胞瓶盖是否关的太严实，造成培养液不能充分的接触二氧化碳。 本人认为第一条是造成您细胞大面积死亡的主要原因。 |
13楼2013-10-11 18:24:00
arystal
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2楼2013-09-29 13:46:27
3楼2013-09-29 16:22:30
梦幻未碎
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4楼2013-09-29 17:01:58
