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[交流] 有没有哪位做过无缝克隆的？有些地方不是很明白，想问问

试剂盒用的哪个公司的？引物长度是不是要有40多bp，目的片段好扩增吗？实验中要注意什么吗？

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1楼 2013-09-16 14:10:14

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906868558

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 6.5
帖子: 4
在线: 2.8小时
虫号: 1608517

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

必克隆的试剂盒，效果和最好的无缝克隆试剂盒完全没有差别，但是价钱却特别便宜，可以放心大胆的用。引物差不多要达到40bp左右，普通pcr的引物也就是20左右嘛，但是由于无缝克隆的过程要有一个同源重组的过程，所以在引物设计上要加上15bp的同源臂，所以是要到40左右。目的片段扩增是否容易本身和无缝克隆这个方法关系不大，要看你的片段长度（必克隆这里引入片段长度可达6kb），复杂性以及引物设计，实验操作等。注意问题的话照着说明书操作就没啥问题，扩增出来的目的片段的纯化建议用切胶回收。

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6楼2014-12-17 17:01:24

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将陈爱喝茶

铁虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 150.5
帖子: 17
在线: 8.7小时
虫号: 2634429

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-05-04 10:02:15
xy656691: 金币+5 2014-07-30 15:55:04

试剂盒根据酶的质量,价格也不一样,一般要看你的需求了。
引物长是因为你加上了载体两边的同源序列，以便扩出来以后与载体进行同源重组。
目的片段好不好扩增要看你的片段长度以及引物设计的是否合理了。
实验中主要是重组时间不能过长，最好不要超过25分钟。另外注意载体和你的片段连接的地方序列一定要完全同源，这样连接效率才会高。

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3楼2014-05-03 21:05:42

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