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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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xy656691

金虫 (正式写手)


[交流] 有没有哪位做过无缝克隆的?有些地方不是很明白,想问问

试剂盒用的哪个公司的?引物长度是不是要有40多bp,目的片段好扩增吗?实验中要注意什么吗?
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水墨蓝

铁虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
定个试剂盒 看说明书操作  上次来了个vazyme的销售介绍的有这个,你可以从网上下个他们的说明书,或者直接问他们的技术支持
4楼2014-05-04 16:23:35
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将陈爱喝茶

铁虫 (初入文坛)


★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-05-04 10:02:15
xy656691: 金币+5 2014-07-30 15:55:04
试剂盒根据酶的质量,价格也不一样,一般要看你的需求了。
引物长是因为你加上了载体两边的同源序列,以便扩出来以后与载体进行同源重组。
目的片段好不好扩增要看你的片段长度以及引物设计的是否合理了。
实验中主要是重组时间不能过长,最好不要超过25分钟。另外注意载体和你的片段连接的地方序列一定要完全同源,这样连接效率才会高。
3楼2014-05-03 21:05:42
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于止水

新虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
GBclonart 无缝克隆试剂盒,引物的5端是与载体同源的序列,但3端要保证足够的完全配对的碱基,引物加起来30多到40多,按照说明书来,基本没问题。而且说明书上有需要注意的以及解决办法,还有引物设计示例。
5楼2014-07-29 16:32:07
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906868558

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
必克隆的试剂盒,效果和最好的无缝克隆试剂盒完全没有差别,但是价钱却特别便宜,可以放心大胆的用。引物差不多要达到40bp左右,普通pcr的引物也就是20左右嘛,但是由于无缝克隆的过程要有一个同源重组的过程,所以在引物设计上要加上15bp的同源臂,所以是要到40左右。目的片段扩增是否容易本身和无缝克隆这个方法关系不大,要看你的片段长度(必克隆这里引入片段长度可达6kb),复杂性以及引物设计,实验操作等。注意问题的话照着说明书操作就没啥问题,扩增出来的目的片段的纯化建议用切胶回收。
6楼2014-12-17 17:01:24
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