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htfhaha123

新虫 (初入文坛)

[交流] EB能加到上样缓冲液里吗？

EB能加到上样缓冲液里与样品混匀后在跑胶吗？配成母液10mg/ml，稀释到缓冲液的比例是多少？
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1楼 2013-09-01 20:00:42
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dehong1573

至尊木虫 (正式写手)
★ ★
htfhaha123(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-02 23:27:13
可以是可以的，但那样会把整个电泳区域都污染了，建议单独染胶
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2楼2013-09-01 22:07:13
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yilunanxia

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
htfhaha123(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-02 23:27:22
可以的，没啥问题。但是这种加到胶里方法染色会导致凝胶成像一半白一半黑。为了避免这种情况缓冲液也相应的加入EB。
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3楼2013-09-01 22:42:50
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linkw

新虫 (初入文坛)
★ ★
htfhaha123(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-02 23:27:30
可以，但是在操作的时候要注意啊，一个不小心很容易把实验区都污染了，要专门设定一个污染区做
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4楼2013-09-02 15:01:50
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htfhaha123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dehong1573 at 2013-09-01 22:07:13
可以是可以的，但那样会把整个电泳区域都污染了，建议单独染胶

谢谢啊，我看了一些文献上说其实是前染和后染的效果要好点，但是老师执意要加到上样缓冲液中，人为的点样误差也会对结果造成影响的啊
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6楼2013-09-02 21:39:32
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htfhaha123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yilunanxia at 2013-09-01 22:42:50
可以的，没啥问题。但是这种加到胶里方法染色会导致凝胶成像一半白一半黑。为了避免这种情况缓冲液也相应的加入EB。

老师让把EB母液加到未使用的6*loading buffer里，我不太清楚加入量要多少
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7楼2013-09-02 21:41:24
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yilunanxia

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by htfhaha123 at 2013-09-02 21:41:24
老师让把EB母液加到未使用的6*loading buffer里，我不太清楚加入量要多少...

抱歉我没这么加过，要不你可以试试这样的操作，把EB稀释到工作液后1:1与6*混合，然后再使用。
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8楼2013-09-02 21:48:32
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lqbzfun

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★
htfhaha123(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-02 23:27:59
完全可以，EB稀释1000倍后再加。
何必用EB呢，你用这种方法的话，非常省试剂。还不如去买个gel  red。一支650人民币，500μl，平时我都是稀释500倍，然后10μl 体系，加1μl染料。商家宣称无毒，但我平时还是小心翼翼。
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9楼2013-09-02 23:04:50
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htfhaha123

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by lqbzfun at 2013-09-02 23:04:50
完全可以，EB稀释1000倍后再加。
何必用EB呢，你用这种方法的话，非常省试剂。还不如去买个gel  red。一支650人民币，500μl，平时我都是稀释500倍，然后10μl 体系，加1μl染料。商家宣称无毒，但我平时还是小心翼 ...

老师觉得EB效果最好，所以就这样了。还是要谢谢你喽
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10楼2013-09-03 15:16:00
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supersky3195

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用EB加缓冲液中效果不怎么好，有时跑不出来，你不如用楼上的说的GEL RED。用量少，加到缓冲液里，效果不错。
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11楼2013-09-03 22:43:02
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lqbzfun

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by htfhaha123 at 2013-09-03 15:16:00
老师觉得EB效果最好，所以就这样了。还是要谢谢你喽...

EB有他的优势，迁移率小，定位精确。
其他染料有时定位不准，影响判断，据需选择。
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12楼2013-09-04 10:02:44
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lqbzfun

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by supersky3195 at 2013-09-03 22:43:02
用EB加缓冲液中效果不怎么好，有时跑不出来，你不如用楼上的说的GEL RED。用量少，加到缓冲液里，效果不错。

EB也还行，灵敏度没有gel red高，却胜在定位精确。gel red 有时偏离较大
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13楼2013-09-04 10:03:57
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yingying15885楼
2013-09-02 18:22   回复  
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