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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SYGR Green核酸染料I 怎么样才能将胶染好
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sysw

银虫 (小有名气)

[求助] SYGR Green核酸染料I 怎么样才能将胶染好

我们实验室在用SYGR Green核酸染料I跑胶时，经常会出现，条带不清晰，有时连Mark都看不清楚。但有时又能跑出很漂亮的胶，请问一下大家，有谁知道要怎么样才能跑出一张很漂亮的图吗？我们是将SYGR Green核酸染料I直接加到胶里的。谢谢了。
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1楼2012-07-30 11:44:27
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回帖置顶 ( 共有1个 )

uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-30 13:49:53
amisking: 回帖置顶 2012-07-30 20:10:55
sysw: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-08-04 09:44:30
琼脂糖胶电泳吗？
我们实验室都是用SYGR Green I原液配成含有核酸染料的loading buffer，非常方便好用也没有污染。
具体方法就是按照每3微升SYGR Green I原液加入1毫升普通loading buffer中的比例配置，混匀后，可以分装。短时间内可以四度保存，长期就-20℃冰冻保存，避光。要用就拿出来。
胶做好后，按照1:6的上样比例将PCR样品或者DNA样品与配好的loading buffer混匀，放置几分钟。然后点样，电泳。OK。
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3楼2012-07-30 13:35:10
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普通回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sysw: 金币+1, ★有帮助 2012-08-04 09:44:16
是否浓度偏低或者混合不均匀的原因？
一般加到胶里浓度要比加到样品里浓度高。楼主可以试试加到样品里包括MARKER.
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2楼2012-07-30 12:13:43
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sysw: 金币+1, ★有帮助 2012-08-04 09:44:46
SYGR Green核酸染料跑胶不用直接加到胶里的，和loading buffer 一块儿跑胶就行了。
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coasttocoast。
4楼2012-07-30 13:45:53
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-30 20:11:00
加胶里没有问题，做成loading buffer也没问题。跑漂亮的图片的秘诀关键还是在buffer，电泳时换新的buffer，制胶时也用新的buffer。电压稍低点5-10v/cm，多跑点时间也无所谓。别拿水制胶，别用跑了很久的缓冲液，勤快点，只要不是样品的事，绝对是一次成功的电泳。
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金币是赌出来的
5楼2012-07-30 15:44:23
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real-gold

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by uneei at 2012-07-30 13:35:10
琼脂糖胶电泳吗？
我们实验室都是用SYGR Green I原液配成含有核酸染料的loading buffer，非常方便好用也没有污染。
具体方法就是按照每3微升SYGR Green I原液加入1毫升普通loading buffer中的比例配置，混匀后，可 ...

能问下，你们是使用哪个公司的SYGR Green I？
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6楼2012-07-30 19:42:41
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uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

找英骏公司买的。好像是进口的吧。我们用的是1×TAE做缓冲液，做胶用的都是新的，电泳液换的倒不是特别勤，也没啥影响。就是加热琼脂糖要注意受热均匀，全部化开了再倒进模具，不然胶做不好电泳图片自然很差了。
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7楼2012-07-30 20:09:00
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lilybrucelee

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by uneei at 2012-07-30 13:35:10
琼脂糖胶电泳吗？
我们实验室都是用SYGR Green I原液配成含有核酸染料的loading buffer，非常方便好用也没有污染。
具体方法就是按照每3微升SYGR Green I原液加入1毫升普通loading buffer中的比例配置，混匀后，可 ...

DNA样品与loading buffer混匀后，放几分钟请问不放几分钟马上点行不？
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8楼2013-01-30 16:11:27
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lilybrucelee

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by uneei at 2012-07-30 13:35:10
琼脂糖胶电泳吗？
我们实验室都是用SYGR Green I原液配成含有核酸染料的loading buffer，非常方便好用也没有污染。
具体方法就是按照每3微升SYGR Green I原液加入1毫升普通loading buffer中的比例配置，混匀后，可 ...

还有那marker怎么办？
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9楼2013-01-30 16:12:33
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JIN1990

金虫 (小有名气)

实验斗士

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by wjswj at 2012-07-30 15:44:23
加胶里没有问题，做成loading buffer也没问题。跑漂亮的图片的秘诀关键还是在buffer，电泳时换新的buffer，制胶时也用新的buffer。电压稍低点5-10v/cm，多跑点时间也无所谓。别拿水制胶，别用跑了很久的缓冲液，勤快 ...

弱弱的问句，如果用水制胶了会怎么样？
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天天出数据，月月出文章
10楼2013-05-16 15:55:22
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