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sysw

银虫 (小有名气)

[求助] SYGR Green核酸染料I 怎么样才能将胶染好

我们实验室在用SYGR Green核酸染料I跑胶时,经常会出现,条带不清晰,有时连Mark都看不清楚。但有时又能跑出很漂亮的胶,请问一下大家,有谁知道要怎么样才能跑出一张很漂亮的图吗?我们是将SYGR Green核酸染料I直接加到胶里的。谢谢了。
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uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-07-30 13:49:53
amisking: 回帖置顶 2012-07-30 20:10:55
sysw: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-08-04 09:44:30
琼脂糖胶电泳吗?
我们实验室都是用SYGR Green I原液配成含有核酸染料的loading buffer,非常方便好用也没有污染。
具体方法就是按照每3微升SYGR Green I原液加入1毫升普通loading buffer中的比例配置,混匀后,可以分装。短时间内可以四度保存,长期就-20℃冰冻保存,避光。要用就拿出来。
胶做好后,按照1:6的上样比例将PCR样品或者DNA样品与配好的loading buffer混匀,放置几分钟。然后点样,电泳。OK。
3楼2012-07-30 13:35:10
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普通回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
sysw: 金币+1, 有帮助 2012-08-04 09:44:16
是否浓度偏低或者混合不均匀的原因?
一般加到胶里浓度要比加到样品里浓度高。楼主可以试试加到样品里包括MARKER.
2楼2012-07-30 12:13:43
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tupac225

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
sysw: 金币+1, 有帮助 2012-08-04 09:44:46
SYGR Green核酸染料跑胶不用直接加到胶里的,和loading buffer 一块儿跑胶就行了。
coasttocoast。
4楼2012-07-30 13:45:53
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wjswj

木虫 (正式写手)

小木虫领金币专业户

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 鼓励发帖交流问题。 2012-07-30 20:11:00
加胶里没有问题,做成loading buffer也没问题。跑漂亮的图片的秘诀关键还是在buffer,电泳时换新的buffer,制胶时也用新的buffer。电压稍低点5-10v/cm,多跑点时间也无所谓。别拿水制胶,别用跑了很久的缓冲液,勤快点,只要不是样品的事,绝对是一次成功的电泳。
金币是赌出来的
5楼2012-07-30 15:44:23
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real-gold

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by uneei at 2012-07-30 13:35:10
琼脂糖胶电泳吗?
我们实验室都是用SYGR Green I原液配成含有核酸染料的loading buffer,非常方便好用也没有污染。
具体方法就是按照每3微升SYGR Green I原液加入1毫升普通loading buffer中的比例配置,混匀后,可 ...

能问下,你们是使用哪个公司的SYGR Green I?
6楼2012-07-30 19:42:41
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uneei

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

找英骏公司买的。好像是进口的吧。我们用的是1×TAE做缓冲液,做胶用的都是新的,电泳液换的倒不是特别勤,也没啥影响。就是加热琼脂糖要注意受热均匀,全部化开了再倒进模具,不然胶做不好电泳图片自然很差了。
7楼2012-07-30 20:09:00
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lilybrucelee

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by uneei at 2012-07-30 13:35:10
琼脂糖胶电泳吗?
我们实验室都是用SYGR Green I原液配成含有核酸染料的loading buffer,非常方便好用也没有污染。
具体方法就是按照每3微升SYGR Green I原液加入1毫升普通loading buffer中的比例配置,混匀后,可 ...

DNA样品与loading buffer混匀后,放几分钟请问不放几分钟马上点行不?
8楼2013-01-30 16:11:27
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lilybrucelee

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by uneei at 2012-07-30 13:35:10
琼脂糖胶电泳吗?
我们实验室都是用SYGR Green I原液配成含有核酸染料的loading buffer,非常方便好用也没有污染。
具体方法就是按照每3微升SYGR Green I原液加入1毫升普通loading buffer中的比例配置,混匀后,可 ...

还有那marker怎么办?
9楼2013-01-30 16:12:33
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JIN1990

金虫 (小有名气)

实验斗士

【答案】应助回帖

内容已删除
天天出数据,月月出文章
10楼2013-05-16 15:55:22
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