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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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shanda007

新虫 (初入文坛)

[交流] 胶回收问题 已有9人参与

我是新手，最近做胶回收，担心没回收成功，就在胶回收后取5微升跑个胶看一下，结果一点条带也没有，就没往下做连接转化。
是不是存在一种可能，胶回收后再取少量跑胶没条带，再做连接转化也会成功？
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1楼 2013-08-22 22:37:36
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dl19891023

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
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gyesang: 金币+3, 鼓励应助！ 2013-08-24 02:07:52
gyesang: 回帖置顶 2013-08-24 02:07:54
有可能的，因为胶回收有时浓度比较低，跑电泳根本看不出来条带的，像我之前做酶切，胶回收切开后的质粒有时浓度只有几ng/ul，这样的浓度根本是跑不出条带的，但是接下来的连接和转化还是继续做，仍然可以得到所需的转化子。转化和你的感受态有关，只要感受态转化率还可以，几ng/ul 的浓度也可以转化成功的，我的连接产物浓度估计低到几乎没有，仍然可以转化成功。
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7楼2013-08-23 18:46:26
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Sthunder

木虫 (正式写手)
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-24 02:07:35
一般情况下如果你回收条带比较亮的话，回收后跑胶是能看到条带的，你没有条带估计回收率太低or原本量都不够。不过一般直接做连接也有可能做出来！
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互助互励，共奋共进！！
2楼2013-08-22 23:12:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-23 11:41:48
胶回收肯定会有一些损失的。你回收前的DNA量大约是多少？一般回收率在50%考虑，大致估算一下你回收的样品5μl是多少ng的DNA，看是不是在检测范围。当然，最好是nanodrop定一下量，对建立后面的连接反应也有好处。
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3楼2013-08-23 03:51:49
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grape_vine

金虫 (小有名气)
★ ★
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-23 11:41:54
你看不到很正常啊.除了原始浓度,这个还取决你你的胶回收洗脱体积.一般我都是30ul洗脱,取10ul跑胶.不过你看不见也没关系,还是可以去连接.多做几次就有经验了.
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4楼2013-08-23 08:11:12
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