应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收问题
101/1返回列表
查看: 1631  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

shanda007

新虫 (初入文坛)

[交流] 胶回收问题 已有9人参与

我是新手，最近做胶回收，担心没回收成功，就在胶回收后取5微升跑个胶看一下，结果一点条带也没有，就没往下做连接转化。
是不是存在一种可能，胶回收后再取少量跑胶没条带，再做连接转化也会成功？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-08-22 22:37:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

dl19891023

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+3, 鼓励应助！ 2013-08-24 02:07:52
gyesang: 回帖置顶 2013-08-24 02:07:54
有可能的，因为胶回收有时浓度比较低，跑电泳根本看不出来条带的，像我之前做酶切，胶回收切开后的质粒有时浓度只有几ng/ul，这样的浓度根本是跑不出条带的，但是接下来的连接和转化还是继续做，仍然可以得到所需的转化子。转化和你的感受态有关，只要感受态转化率还可以，几ng/ul 的浓度也可以转化成功的，我的连接产物浓度估计低到几乎没有，仍然可以转化成功。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-08-23 18:46:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-24 02:07:35
一般情况下如果你回收条带比较亮的话，回收后跑胶是能看到条带的，你没有条带估计回收率太低or原本量都不够。不过一般直接做连接也有可能做出来！
赞一下 回复此楼
互助互励，共奋共进！！
2楼2013-08-22 23:12:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-23 11:41:48
胶回收肯定会有一些损失的。你回收前的DNA量大约是多少？一般回收率在50%考虑，大致估算一下你回收的样品5μl是多少ng的DNA，看是不是在检测范围。当然，最好是nanodrop定一下量，对建立后面的连接反应也有好处。
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-23 03:51:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

grape_vine

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-23 11:41:54
你看不到很正常啊.除了原始浓度,这个还取决你你的胶回收洗脱体积.一般我都是30ul洗脱,取10ul跑胶.不过你看不见也没关系,还是可以去连接.多做几次就有经验了.
赞一下 回复此楼
4楼2013-08-23 08:11:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujitianqing

铁虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-24 02:07:43
直接测浓度吧，5ul里的DNA的总量可能都小于100ng，肯定没条带。测过浓度后与载体按照一定的摩尔量的加样连接。
赞一下 回复此楼
5楼2013-08-23 10:39:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
条带不明显不代表没有，有时候连接也会成功的
赞一下 回复此楼
自主创业者，捣腾生物试剂
6楼2013-08-23 11:03:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

33ggdf

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-24 02:08:02
是有这种可能的
建议：1 如果你是pcr的 建议多加几个循环 来加大片段的量
         2 如果你是酶切的 建议你加大质粒的用量 这样你的目的片段应该亮些 然后再把n管的酶切片段和为1管。
赞一下 回复此楼
8楼2013-08-23 19:45:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我是柱哥啊

金虫 (正式写手)
这个不太明白，进来满足好奇心的
赞一下 回复此楼
JustDoIt！
9楼2013-08-23 21:47:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangxue77

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
10楼2013-08-25 23:16:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 shanda007 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 好奇怪的filecode +4 布布和一二 2026-08-08 5/250 2026-08-10 14:20 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +10 yufeiwaner 2026-08-09 10/500 2026-08-10 13:44 by cdutwml
[基金申请] 国自然结果 +3 Vierhys 2026-08-10 5/250 2026-08-10 12:53 by lliang1209
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +5 家与远方 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:45 by 家与远方
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +16 且听虎啸 2026-08-07 23/1150 2026-08-10 12:35 by majunge000
[基金申请] FileCode能看出啥？ +3 要乐观耀哥 2026-08-10 6/300 2026-08-10 12:33 by 要乐观耀哥
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭