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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 胶回收问题
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shanda007

新虫 (初入文坛)

[交流] 胶回收问题 已有9人参与

我是新手，最近做胶回收，担心没回收成功，就在胶回收后取5微升跑个胶看一下，结果一点条带也没有，就没往下做连接转化。
是不是存在一种可能，胶回收后再取少量跑胶没条带，再做连接转化也会成功？
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1楼 2013-08-22 22:37:36
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回帖置顶 ( 共有1个 )

dl19891023

新虫 (初入文坛)
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gyesang: 金币+3, 鼓励应助！ 2013-08-24 02:07:52
gyesang: 回帖置顶 2013-08-24 02:07:54
有可能的，因为胶回收有时浓度比较低，跑电泳根本看不出来条带的，像我之前做酶切，胶回收切开后的质粒有时浓度只有几ng/ul，这样的浓度根本是跑不出条带的，但是接下来的连接和转化还是继续做，仍然可以得到所需的转化子。转化和你的感受态有关，只要感受态转化率还可以，几ng/ul 的浓度也可以转化成功的，我的连接产物浓度估计低到几乎没有，仍然可以转化成功。
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7楼2013-08-23 18:46:26
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普通回帖

Sthunder

木虫 (正式写手)
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-24 02:07:35
一般情况下如果你回收条带比较亮的话，回收后跑胶是能看到条带的，你没有条带估计回收率太低or原本量都不够。不过一般直接做连接也有可能做出来！
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互助互励，共奋共进！！
2楼2013-08-22 23:12:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-23 11:41:48
胶回收肯定会有一些损失的。你回收前的DNA量大约是多少？一般回收率在50%考虑，大致估算一下你回收的样品5μl是多少ng的DNA，看是不是在检测范围。当然，最好是nanodrop定一下量，对建立后面的连接反应也有好处。
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3楼2013-08-23 03:51:49
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grape_vine

金虫 (小有名气)
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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-23 11:41:54
你看不到很正常啊.除了原始浓度,这个还取决你你的胶回收洗脱体积.一般我都是30ul洗脱,取10ul跑胶.不过你看不见也没关系,还是可以去连接.多做几次就有经验了.
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4楼2013-08-23 08:11:12
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yujitianqing

铁虫 (正式写手)
★ ★
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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-08-24 02:07:43
直接测浓度吧，5ul里的DNA的总量可能都小于100ng，肯定没条带。测过浓度后与载体按照一定的摩尔量的加样连接。
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5楼2013-08-23 10:39:41
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子
★
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条带不明显不代表没有，有时候连接也会成功的
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自主创业者，捣腾生物试剂
6楼2013-08-23 11:03:19
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33ggdf

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-08-24 02:08:02
是有这种可能的
建议：1 如果你是pcr的 建议多加几个循环 来加大片段的量
         2 如果你是酶切的 建议你加大质粒的用量 这样你的目的片段应该亮些 然后再把n管的酶切片段和为1管。
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8楼2013-08-23 19:45:53
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我是柱哥啊

金虫 (正式写手)
这个不太明白，进来满足好奇心的
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JustDoIt！
9楼2013-08-23 21:47:42
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wangxue77

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
10楼2013-08-25 23:16:02
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