| 查看: 3270 | 回复: 40 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
小雨莎莎木虫 (正式写手)
|
[求助]
有没有做过transwell的前辈？指点一下
|
||
| 最近在做cell migration的实验，用的是密理博的transwell，8μm的，24孔板适用的那种独立包装的小室，因为以前没做过，所以先做了预实验，但是做了两次预实验都发现最后用结晶紫染色后什么都没有了，是什么状况呢？实验后处理流程大概是这样的：培养结束后，取出小室，用棉签擦掉小室内的膜上未穿过去的细胞，然后把小室悬挂于24孔板的well里，well里预先加入了0.6mL的4%多聚甲醛，室温固定10min，然后用PBS稍微清洗残留的多聚甲醛，包括在小室里的，然后悬挂浸泡在1%的结晶紫（ddH2O配制），20min，室温，然后用PBS洗去浮色。然后悬挂在24孔板里镜检。基本没看到细胞，但是因为在本来小室放置的对应的那个well里找到了少量的细胞，很少，个位数，说明是有穿过去的，但是为啥就是染不出来？难道在处理的时候掉了？哪位虫友帮忙解答一下？谢谢！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 细胞生物学实验经验 |
» 猜你喜欢
什么时候开奖？
已经有4人回复
-
咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否
已经有27人回复
-
为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？
已经有3人回复
-
2027广东省杰青
已经有9人回复
-
朋友圈看到的
已经有5人回复
-
欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律
已经有110人回复
-
明天放榜？
已经有5人回复
-
时间戳变了，能看出什么问题？
已经有11人回复
-
重要消息，中午系统在维护
已经有10人回复
-
投稿咨询
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 注化报名问题咨询，望前辈指点
已经有6人回复
- 请问如何从土壤中分离出真菌啊，有没有相关的培养基卖呢，哪位前辈指点一下，谢谢。
已经有3人回复
- 研一小弟想实习，请问前辈们指点迷津
已经有30人回复
- 有哪位大侠做过transwell测药物通透性实验？求助啊
已经有5人回复
- 小弟打算申请明年日本国立大学十月生，希望各位前辈可以指点一下迷津···
已经有3人回复
- 关于Transwell迁移实验的一些问题
已经有28人回复
- 马上即将大四保研选择导师是如此纠结，希望虫友前辈们指点
已经有22人回复
- 求前辈们指点下缩醛反应的问题
已经有23人回复
- 读博？工作？有点迷茫了，请计算机的各位前辈们来指点迷津
已经有10人回复
- 如何用trizol试剂保存RNA提取材料？请各位前辈指点指点，不甚感激！
已经有14人回复
- 想考人大金融学博士，请问有人大的前辈可以给我指点一下吗？
已经有12人回复
- 药剂方向SCI投稿杂志选择，请各位前辈指点迷津！
已经有13人回复
- 想考协和药物所药化专业研究生，求前辈指点，那边是不是主要倾向于天然药化
已经有11人回复
- 材料加工本科生将来上研选什么方向就业好一点？求前辈指点！
已经有20人回复
- 求助：好多的缩写不知道什么意思，那位选矿的前辈指点一下
已经有12人回复
- 今天收到通信学报的稿件退修通知，请前辈指点
已经有21人回复
- SCI文章审稿人意见回来，却不知如何答复，请各位前辈指点
已经有7人回复
- 求前辈指点，生物专业毕业的我该怎么走未来的路
已经有40人回复
- 前辈指点下：一些杂志的简写
已经有5人回复
- 【求助】新人请教各位前辈液相合成三肽PPG的问题，纠结已久，盼指点~~~
已经有10人回复
rockstonebob
银虫 (初入文坛)
- BioEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 439.6
- 红花: 2
- 帖子: 31
- 在线: 19.5小时
- 虫号: 1569240
- 注册: 2012-01-08
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
6楼2013-08-13 23:16:10
rockstonebob
银虫 (初入文坛)
- BioEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 439.6
- 红花: 2
- 帖子: 31
- 在线: 19.5小时
- 虫号: 1569240
- 注册: 2012-01-08
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小雨莎莎: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-08-13 22:38:52
silicare: 金币+6, BioEPI+1, 谢谢参与 2013-08-21 17:52:48
感谢参与，应助指数 +1
小雨莎莎: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-08-13 22:38:52
silicare: 金币+6, BioEPI+1, 谢谢参与 2013-08-21 17:52:48
|
个人认为有可能的原因如下： 第一：细胞培养的时间很重要，也很难掌握，这个就看你自己对所培养细胞生长特性的了解程度了。长得久了穿出来的会太多，长的时间少了，穿出来会太少。像你这种情况有可能属于上述第二种，而且你找到了下室有细胞，不一定就代表穿出来了，因为如果穿出来太少，自然有可能脱落。我个人认为，掌握好细胞在小室中的培养时间长度是实验成功与否最关键的影响因素。为了这步能成功，建议铺细胞的时候多铺几个孔，然后培养相同长度的时间，只要你铺的孔够多，总会有那么几个孔在预计的时间内穿出令你满意的细胞术（当然，这样做是建立在经济基础上的），预实验也可以这样摸条件。 第二、建议取出小室后先4%多聚甲醛固定（可固定10-15分钟），然后再染色（0.5%的结晶紫15分钟为宜），最后再用棉签擦。先用极小流量的自来水冲洗小室柱子外侧，切记不要冲到小室底部，但是得冲过柱子侧面的水流过底面，后用棉签擦内室面，晾干、拍照。 第三、小室铺细胞的时候一定要均匀。要不然肯定是没细胞可穿了，大家都会集中在最中间，穿过去的也会脱落。 |
小雨莎莎2楼2013-08-13 19:39:10
19楼2013-08-20 11:56:28
小雨莎莎
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3963.2
- 散金: 6
- 红花: 6
- 帖子: 995
- 在线: 381.5小时
- 虫号: 1281496
- 注册: 2011-04-29
- 性别: MM
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
3楼2013-08-13 22:43:25
rockstonebob
银虫 (初入文坛)
- BioEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 439.6
- 红花: 2
- 帖子: 31
- 在线: 19.5小时
- 虫号: 1569240
- 注册: 2012-01-08
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
4楼2013-08-13 23:14:44
rockstonebob
银虫 (初入文坛)
- BioEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 439.6
- 红花: 2
- 帖子: 31
- 在线: 19.5小时
- 虫号: 1569240
- 注册: 2012-01-08
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
5楼2013-08-13 23:15:36
小雨莎莎
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3963.2
- 散金: 6
- 红花: 6
- 帖子: 995
- 在线: 381.5小时
- 虫号: 1281496
- 注册: 2011-04-29
- 性别: MM
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
7楼2013-08-13 23:25:52
小雨莎莎
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3963.2
- 散金: 6
- 红花: 6
- 帖子: 995
- 在线: 381.5小时
- 虫号: 1281496
- 注册: 2011-04-29
- 性别: MM
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
8楼2013-08-14 14:00:40
rockstonebob
银虫 (初入文坛)
- BioEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 439.6
- 红花: 2
- 帖子: 31
- 在线: 19.5小时
- 虫号: 1569240
- 注册: 2012-01-08
- 性别: GG
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
9楼2013-08-14 21:32:21
小雨莎莎
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 1
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 3963.2
- 散金: 6
- 红花: 6
- 帖子: 995
- 在线: 381.5小时
- 虫号: 1281496
- 注册: 2011-04-29
- 性别: MM
- 专业: 细胞增殖、生长与分化
10楼2013-08-16 10:52:38
