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小雨莎莎木虫 (正式写手)
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[求助]
有没有做过transwell的前辈？指点一下
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| 最近在做cell migration的实验，用的是密理博的transwell，8μm的，24孔板适用的那种独立包装的小室，因为以前没做过，所以先做了预实验，但是做了两次预实验都发现最后用结晶紫染色后什么都没有了，是什么状况呢？实验后处理流程大概是这样的：培养结束后，取出小室，用棉签擦掉小室内的膜上未穿过去的细胞，然后把小室悬挂于24孔板的well里，well里预先加入了0.6mL的4%多聚甲醛，室温固定10min，然后用PBS稍微清洗残留的多聚甲醛，包括在小室里的，然后悬挂浸泡在1%的结晶紫（ddH2O配制），20min，室温，然后用PBS洗去浮色。然后悬挂在24孔板里镜检。基本没看到细胞，但是因为在本来小室放置的对应的那个well里找到了少量的细胞，很少，个位数，说明是有穿过去的，但是为啥就是染不出来？难道在处理的时候掉了？哪位虫友帮忙解答一下？谢谢！ |
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 细胞生物学实验经验 |
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小雨莎莎
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3楼2013-08-13 22:43:25
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18楼2013-08-20 09:15:14
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