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angelsamir

新虫 (初入文坛)

[求助] 自噬新手求助

各位好，我是做自噬的新手，主要研究某两个基因各自在敲低水平下对自噬的影响
我是这样诱导自噬的（6-well plate）：A549细胞长至70-80%，用HBSS（Invitrogen：14025-092，含钙镁的）诱导0，0.5，1，2，4，8h，用100ul RIPA裂解的细胞，WB检测LC3B（sigma:L7543，1:2000）和p62（MBL：货号忘了，1:1000），结果已经贴上来了，膜给裁开了，从上往下出现的带分别是（p62，β-actin，LC3B，没带的不用管）
我的问题是：
1.LC3B的变化怎么不明显呢？是不是没诱导出来自噬？
2.自噬如果发生了，p62是不是一定会被降解？（前提是这个是正常A549细胞，未经任何处理）
3.之前我做过这个细胞，0.5h时候p62完全降解了，最近做的p62完全就不降解，结果一点变化都没有
4.我现在不知道应该怎么往下做，希望各位大神指点指点，问题出在哪？
自噬新手求助
3s.jpg
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1楼 2013-08-05 17:22:31
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zdx0

木虫 (小有名气)
5个条带？最后一个是LC3吧
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科研是长远的
2楼2013-08-05 18:57:30
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angelsamir

新虫 (初入文坛)
是的，是LC3B，我觉得诱导很不明显，我用的HBSS，现在还出现了一个问题，我诱导出来的LC3B II比不诱导的还要低，为什么呢？
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3楼2013-08-20 16:49:22
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