24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 1188  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

稚涵晓晓

新虫 (初入文坛)

[求助] 杯具的求助,关于蛋白质分离纯化,出峰太早,各种凝胶柱都试过就是分不开~~

本人想要分离一种蛋白质,用Native-PAGE电泳跑过8%的分离胶,分子量在200KDa附近,可是用Sephacryl s-200和Sephacryl s-300均尝试过,悲剧的是出峰都好早,第8管就出峰了,并且只有一个峰,也就是说根本没分离开,流速我都设定的是0.5ml/min,3ml/管,柱长是100cm,内径1.0cm的,这是怎么回事呀???
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Rick在路上

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的蛋白到底多大?听起来好像是根据跑胶的大小来判断的?
一方面可以了解一下蛋白的理论分子量,还可以再跑SDS-PAGE看看,变性和非变性条件的两张图有什么区别。
多用几种柱子组合起来纯度会提高很多。即便是superdex系列分子筛这种比较高分辨率的,分离效率也挺一般的,不差个几十kd一般难以完全分开。
再就是过柱时候可以加一些还原剂,可能效果会好。试试看。
5楼2013-07-30 21:36:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
如果不是柱子的问题,应该是你的样品中主要成分集中在200kD。你可以先不用凝胶过滤,试试用其它柱子。
2楼2013-07-30 11:09:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

稚涵晓晓

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-30 11:09:02
如果不是柱子的问题,应该是你的样品中主要成分集中在200kD。你可以先不用凝胶过滤,试试用其它柱子。

跑电泳看的话是,我要的蛋白在200KDa,还有其他就是在100KDa左右了,我现在考虑一个是蛋白是不是在高浓度时聚合在一起了……如果要真是该怎么解决?加NaCl?
3楼2013-07-30 11:17:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wrx1989

银虫 (初入文坛)

可以根据待分离蛋白的其它性质,选择其它的分离方法,如离子交换,疏水层析等,
4楼2013-07-30 13:28:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 320求调剂 +4 深郊akm 2026-04-17 4/200 2026-04-17 17:32 by 一切OK
[教师之家] 山东双非院校考核超级无底线,领导幸灾乐祸,教师遭殃恐 +4 qut2026 2026-04-11 8/400 2026-04-17 16:10 by 会飞的猪157
[考研] 0854求调剂 +21 门路摸摸 2026-04-15 25/1250 2026-04-17 15:45 by qzxyhcsy
[考研] 279求调剂 +13 张番茄不炒蛋 2026-04-11 13/650 2026-04-17 10:38 by cuisz
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀,最好在一个月之内的,研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 5/250 2026-04-17 10:02 by bobvan
[考研] 恳请有学校收留 +8 柯淮然 2026-04-12 8/400 2026-04-17 09:34 by 猪会飞
[考研] 294求调剂 +14 淡然654321 2026-04-15 14/700 2026-04-16 21:01 by lpl364211
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-16 15:18 by jiahl2024
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+7 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 29/1450 2026-04-16 09:00 by screening
[考研] 求调剂学校 +14 不会吃肉 2026-04-13 16/800 2026-04-15 21:59 by noqvsozv
[考研] 求调剂 +11 小聂爱学习 2026-04-11 15/750 2026-04-15 21:57 by noqvsozv
[考研] 求助调剂,跨调 +19 X十甫寸Y 2026-04-11 20/1000 2026-04-15 21:18 by cuisz
[考研] 297工科调剂? +14 河南农业大学-能 2026-04-13 15/750 2026-04-15 13:25 by 黑科技矿业
[考研] 复试调剂 +21 积极向上; 2026-04-10 23/1150 2026-04-15 12:50 by 西北望—风沙
[考研] 211本科材料化工求调剂 +19 YHLAH 2026-04-11 23/1150 2026-04-14 22:25 by fenglj492
[考研] 各位老师好,求调剂,本科211,一志愿天津大学生物与医药学硕,差两名录取。 +11 路六六jjj 2026-04-13 11/550 2026-04-14 16:01 by zs92450
[考研] 药学305求调剂 +10 玛卡巴卡boom 2026-04-10 10/500 2026-04-14 15:55 by zs92450
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] 297工科,求调剂? +13 河南农业大学-能 2026-04-12 13/650 2026-04-13 14:12 by dingyanbo1
[考研] 求调剂,一志愿大连理工大学354分 +5 雨声余生 2026-04-11 6/300 2026-04-11 16:12 by 雨声余生
信息提示
请填处理意见