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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 一抗为什么要加牛奶
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forever909

银虫 (小有名气)

[求助] 一抗为什么要加牛奶

做western，配一抗，二抗，为什么总是要加牛奶啊，不加可以不，牛奶有什么作用啊，谢谢了
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快乐是最重要的。。。。。。
1楼 2013-07-29 14:32:48
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zlee

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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1949stone: 回帖置顶 2013-07-29 15:17:09
1949stone: 金币+1, 鼓励 2013-07-29 15:17:50
对的，起封闭的作用。不然会造成假阳性。
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3楼2013-07-29 15:07:00
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roomofxw

木虫 (正式写手)
★
1949stone: 回帖置顶 2013-07-29 15:17:12
1949stone: 是滴 千万不要用国产 2013-07-29 15:17:25
1949stone: 金币+1, 忘记加金币了 2013-07-29 15:17:34
是的，封闭作用。还得用进口奶粉
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4楼2013-07-29 15:13:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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forever909(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-30 10:07:00
理论上如果膜经过5%的牛奶或者BSA封闭过后可以不用在抗体里加牛奶/奶粉/BSA。在抗体里加牛奶/BSA的主要目的有两个：
1. 利用过量其它来源的蛋白保护抗体，尤其是经纯化过的抗体，容易被蛋白酶攻击或者变性。
2. 抗体中的牛奶/BSA中的蛋白对膜上的位点起进一步封闭作用，避免抗体非特异性结合。
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10楼2013-07-29 23:34:54
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l91z03y09

银虫 (初入文坛)
上面说的已经很好了，这个其实和你的蛋白还是有一些关系的，你如果测得仅仅是一些普通的蛋白，用含有蛋白的牛奶是可以的（不是非得用牛奶不可，只是牛奶的蛋白含量比较高，而且价格低廉相对BSA即牛血清白蛋白）但是如果你需要做一些磷酸化蛋白的检测的话，牛奶就显得不那么适合了，原因主要是由于牛奶中的一些ca离子，会对实验结果造成一些影响。好了，我要说的就这么多了，希望能对您有所帮助！
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14楼2013-09-23 22:06:59
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普通回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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1949stone: 差不多 一般就是封闭 2013-07-29 15:18:02
1949stone: 金币+1, 最近总忘记给金币 2013-07-29 15:18:14
据同学说是为了让牛奶去填补膜上其他空余的孔，而使特异性抗体能够跟目的蛋白结合，希望高人指点
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2013-07-29 15:00:20
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

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forever909(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-30 10:06:41
这个问题问得好，是起封阻膜上其他结合位点的作用，也可以用1%明胶封阻。但是为什么不用其他的蛋白进行封阻，就不知道了，坐等高手
我猜想应该是不会和一抗非特异性结合吧
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5楼2013-07-29 15:36:54
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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只知道这个就是起封闭的作用。
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6楼2013-07-29 18:40:55
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spaceman_jia

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-29 20:36:07
不是牛奶，而是脱脂奶粉。要的是其中蛋白的封闭左右。
用脱脂奶粉是为了省成本，如果你愿意，可以用纯BSA来封闭，效果更好。
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7楼2013-07-29 19:41:14
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hexia313

金虫 (小有名气)
G跟封闭一样的
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8楼2013-07-29 20:22:39
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ppwawa0322

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
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forever909(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-30 10:06:51
封闭作用，防止一抗与其他位点结合，可以不用非得是牛奶吧，我用过BSA，不过是一个意思
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9楼2013-07-29 20:53:56
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