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学术问题

银虫 (小有名气)

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[求助] 有关半定量实验结果图片的问题！！切切！1

我是做了个梯度PCR 退火温度是 56 58度但是条带特别的模糊 35个循环求分析这是为什么？应该怎么办呢？我以前也没做过啊（其中最亮的是内参，左侧是56度右侧是58度其他几个基因太模糊能用吗？）

56 58 退火(1234567+内参)swzx 2013-07-26 22hr 23min.jpg

[ Last edited by 学术问题 on 2013-7-27 at 10:35 ]

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微生物小硕

1楼 2013-07-27 10:33:40

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孙妙妙

金虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
学术问题: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-28 17:08:44

引用回帖:

6楼: Originally posted by 学术问题 at 2013-07-27 17:11:07
我的目的条带应该在100bp--300bp内这个内参的引物我是直接在文献上找的，内参具体多大我不太清楚。分别是不同的基因，左侧是56度的退火温度，右侧是58度的退火温度。我是不是应该在提高退火温度？？我今天刚 ...

半定量是需要摸索循环数加样量及退火温度的，你内参的引物应该是没有问题的，但你那个亮度，一看就是超过阈值很多，一般内参22-26个循环最多了。我说的引物有问题的是你的目的基因引物，我们一般做出来都是只有1条带的，你那个每个都有很多，说明引物非特异。同时你循环数那么多也可能是引起非特异的主要原因。希望有帮助