24小时热门版块排行榜    

查看: 2005  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

学术问题

银虫 (小有名气)

[求助] 有关半定量实验结果图片的问题!!切切!1

我是做了个梯度PCR  退火温度是 56  58度   但是条带特别的模糊  35个循环  求分析这是为什么? 应该怎么办呢? 我以前也没做过啊 (其中最亮的是内参,左侧是56度  右侧是58度  其他几个基因太模糊  能用吗?)
有关半定量实验结果图片的问题!!切切!1
56 58 退火(1234567+内参)swzx 2013-07-26 22hr 23min.jpg

[ Last edited by 学术问题 on 2013-7-27 at 10:35 ]
回复此楼
微生物小硕
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孙妙妙

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的图标的不清楚,没发具体分析,还有你的引物设计的不行,怎么有那么多非特异扩增。另外半定量循环数一般不超出过30个,还有你是用的什么PCR体系,Mix还是分开Tag酶。有很多关于半定量的文章,可以好好看看,希望对你有帮助
好好做实验!
4楼2013-07-27 15:57:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩。热心的顾问 2013-07-27 13:53:19
出现多条带,而且有明显的引物二聚体,说明PCR效果差。可能是引物特异性不好、退火温度不合适,或者是模板质量不好。
2楼2013-07-27 12:50:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

biomed_fanyi

新虫 (初入文坛)


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 13:53:31
本帖内容被屏蔽

3楼2013-07-27 12:54:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

学术问题

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by biomed_fanyi at 2013-07-27 12:54:44
我觉得是PCR没有成功。理想状态时其他样品都有一条和内参一样大小的带么?

详细说说你的实验设计吧- 这是测得不同样品中同一个基因?内参、样品模板分别是什么?

我的目的条带应该在100bp--300bp内   这个内参的引物我是直接在文献上找的,内参具体多大  我不太清楚 。分别是不同的基因,左侧是56度的退火温度,右侧是58度的退火温度。我是不是应该在提高退火温度??我今天刚做了个59度的退火温度,结果还没出来。。内参是 肌动蛋白,样品模板是cDNA。
微生物小硕
5楼2013-07-27 17:09:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +5 启萌科技 2026-08-12 17/850 2026-08-14 17:48 by 启萌科技
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +5 Tide man 2026-08-14 6/300 2026-08-14 17:26 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +6 majunge000 2026-08-11 8/400 2026-08-14 14:44 by 医学老男孩
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] 好奇怪的filecode +6 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-14 13:38 by Equinoxhua
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
信息提示
请填处理意见