| 查看: 4965 | 回复: 10 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[求助]
ALP活性检测中细胞裂解问题
|
|||
| 大家好，想请教一下做ALP 活性检测时大家一般都用的什么方法来裂解细胞的，我看文献里面有各种不同的方法，但是都没有很详细的信息，比如Freezing-Thawing,那这个冷冻和解冻的时间各是多少呢?另外就是用Triton,0.2%,0.5%的都有，但不知道哪个效果比较好，已经多长时间比较适宜呢？另外，用triton进行裂解时是否应该在冰上操作呢？另外就是因为要做ALP活性检测，想了解下Triton的量对实验会不会有影响， 因为我的细胞数量较多，用的是24孔板，所以担心100uL的Triton不能降细胞完全裂解，所以想说用200uL或是500uL的量是不是也可以，最后各取出50uL来做BCA和ALP活性的测试。还有就是关于细胞裂解后是否需要离心的问题，我现在是裂解后就直接取出上层液进行后续的实验，没有离心，也没有在取细胞液时将孔板混匀（因为担心细胞碎片会漂到上层），不知道这样可不可以的。另外还有个最重要的问题，想请问下有没有人拍过细胞裂解后的形貌照片的，因为我发现我的细胞裂解半小时后好像还是完整的细胞，不知道是不是我的细胞根本没用裂解完全，所以想知道裂解后细胞应该是个什么样子。非常感谢！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 实验交流 |
» 猜你喜欢
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有236人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有15人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 组织和细胞中，膜蛋白，胞浆蛋白，核蛋白提取裂解液区别
已经有5人回复
- 细胞裂解提取细胞内的总蛋白，需要使用什么试剂盒，求推荐
已经有14人回复
- 细胞裂解
已经有13人回复
- 细胞裂解缓冲液的配制？求助各位大虾
已经有3人回复
- 细胞裂解液的配置
已经有11人回复
- western blot 细胞裂解时间
已经有7人回复
- 求细胞裂解液的详细配方
已经有6人回复
- 【求助/交流】请各位帮帮忙~~细胞裂解液如何保存，能保存多长时间？
已经有8人回复
- 【求助/交流】IP新手求教：beads和细胞裂解液孵育之后可以直接放到-70度冻存吗？
已经有6人回复
- 【求助/交流】细胞裂解都有哪些方法
已经有8人回复
- 【求助/交流】细胞裂解的问题
已经有19人回复
妙语1989
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1326.5
- 散金: 31
- 红花: 3
- 帖子: 255
- 在线: 83.5小时
- 虫号: 1131928
- 注册: 2010-10-25
- 性别: MM
- 专业: 药理学其他科学问题
6楼2013-07-30 09:40:29
妙语1989
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1326.5
- 散金: 31
- 红花: 3
- 帖子: 255
- 在线: 83.5小时
- 虫号: 1131928
- 注册: 2010-10-25
- 性别: MM
- 专业: 药理学其他科学问题
2楼2013-07-26 10:04:42
送红花一朵 |
你好，非常感谢哦！那就是说取出多少量来做ALP检测或是蛋白活性检测是没有影响的是吗？冻融过程是经过-70℃和37℃反复的对吗，那就是整个冻融过程就是让它完全冻住和完全溶解是吧，溶解过程需要水浴加热不呢？但是不是温度太高会影响蛋白的活性么？ 那你把细胞全部吹大下来后应该还要离心吧，你采用的离心条件是什么呢，一定要四度不？ 另外不知道你测ALP活性的时候是用的试剂盒还是自己配置的，我看p-NP标准曲线绘制这一块，有的是把p-NP的储存液用buffer稀释到一定的浓度范围，有的确是用NaOH溶液（也就是反应终止液）来稀释到一定的浓度范围，所以我都很迷惑了。 另外不知道你有没有做过ALP染色的呢，我用的是BCIP/NTB来染的，但染出来怎么是蓝色的，感觉挺奇怪。 问题有点多，麻烦你了哦！再次感谢！ |
3楼2013-07-26 16:46:33
妙语1989
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1326.5
- 散金: 31
- 红花: 3
- 帖子: 255
- 在线: 83.5小时
- 虫号: 1131928
- 注册: 2010-10-25
- 性别: MM
- 专业: 药理学其他科学问题
4楼2013-07-27 10:31:35
