24小时热门版块排行榜    

查看: 3169  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

达菲鸭

新虫 (初入文坛)

[求助] 提取的RNA样本,经过DNA酶处理,但总是处理不干净

我们用qiagen的试剂盒提取了弧菌的RNA,然后用fermentas的cDNA试剂盒里面的DNA酶和buffer来去除gDNA。但是处理后的RNA经PCR检测竟然还是P出了目的产物,这会影响后面的qPCR。

我们以前做过几次,没有遇到这个问题啊,以前都是P不出来的。

可能是RNA的样品中的杂质影响了dna酶的工作么?因为我们后来换了一家的国产的试剂盒同样没有处理干净。这一次提的RNA,有几管的260/280,260/230都在2.1在2.1左右,应该还比较纯吧,但也还是除不干净DNA。

有没有谁知道是什么原因吗?求赐教,十分感谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

达菲鸭

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-23 00:32:05
不应该呀。是不是你的反应体系浓度太高了?还有,你用水做模板能不能P出来?我想是不是体系污染了。...

我又重提了一批RNA,两个菌的,做了Dnase1处理,结果一管P出来,另一管就没有P出来..........
11楼2013-07-24 15:44:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-21 23:10:07
可能是样品太多,酶加少了。DNase消化要根据样品的量来做,可以参考酶的说明书。
2楼2013-07-21 14:23:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yilunanxia

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
达菲鸭(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩。 2013-07-22 20:10:37
PCR出了目标条带就是说你的RNA里有DNA了,加大DNase吧
3楼2013-07-21 16:07:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

达菲鸭

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-21 14:23:56
可能是样品太多,酶加少了。DNase消化要根据样品的量来做,可以参考酶的说明书。

啊,fermentas的试剂盒说的是1μg的RNA不要使用超过1个单位的DNA酶,然后我就是按这个量加的。难道应该把酶的量再加大一些吗?
4楼2013-07-21 18:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +32 医学老男孩 2026-08-13 74/3700 2026-08-16 21:05 by 医学老男孩
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 6/300 2026-08-16 20:07 by 奶牛小黑
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +9 Ldrop2023 2026-08-13 9/450 2026-08-16 13:24 by wukun_007
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] filecode +8 cratir 2026-08-14 12/600 2026-08-15 18:08 by zyfgau
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
信息提示
请填处理意见