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08级退步

新虫 (初入文坛)

[交流] 提RNA的求指教 已有2人参与

本人新手提RNA，首先不知道诸位的提出来的浓度咋样，我的有6000多7000多，是不是有问题啊？260/280还好1.9多，电泳结果是几条带啊？在反转录成cDNA时使用的是随机引物，那电泳跑出来怎么看才是好的呀？是看单一的条带吗？大小怎么说？
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1楼 2013-07-19 12:33:48
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wan625963882

铁虫 (初入文坛)
★ ★
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137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-20 16:24:28
你提的浓度好高啊，跑胶3条带，从上到下依次是28S，18S，5S。一般只要电泳结果条带没有弥散，且28S条带亮度是18S的二分之一，就可以认为总RNA提取质量可以满足进一步实验要求
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2楼2013-07-20 14:51:44
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wan625963882

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不好意思。28S的亮度是18S的两倍
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3楼2013-07-20 14:54:29
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Sthunder

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
RNA提取的时候要注意被降解，提取得好的不会有任何弥散，可以看到4条甚至5条带。从浓度上说，你这个真的是太高了点，当然也要看你提取体系。反转录根绝盒子的方案做就好，反转录后用PCR进行验证（一般用看家基因），电泳无法验证cDNA完整性的哈。
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互助互励，共奋共进！！
4楼2013-07-20 21:59:21
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08级退步

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Sthunder at 2013-07-20 21:59:21
RNA提取的时候要注意被降解，提取得好的不会有任何弥散，可以看到4条甚至5条带。从浓度上说，你这个真的是太高了点，当然也要看你提取体系。反转录根绝盒子的方案做就好，反转录后用PCR进行验证（一般用看家基因）， ...

我用一瓶长满的细胞提取的，反转录出来后我是要看其中某种基因的表达量水平，是不是做绝对定量就好？
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5楼2013-07-22 16:06:25
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Sthunder

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
5楼: Originally posted by 08级退步 at 2013-07-22 16:06:25
我用一瓶长满的细胞提取的，反转录出来后我是要看其中某种基因的表达量水平，是不是做绝对定量就好？...

RT-PCR和qRT-PCR或者杂交都可以看表达水平，看你具体目的了。简单的就直接做个RT-PCR就好，记得做对照和内参。如果要想知道具体表达量就做个qRT-PCR. GOOD LUCK
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互助互励，共奋共进！！
6楼2013-07-23 00:39:11
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