| 查看: 2142 | 回复: 9 | ||||
[交流]
有关羰基还原酶酶活测定中的几个问题
|
| 小弟做的是NADPH依赖型羰基还原酶，该酶在还原底物的过程中消耗NADPH。文献中测酶活是在A340nm处读到1min内的吸光度的降低的数值。反应总体系为250ul，包括100mmol/L磷酸钾缓冲液PH6.0，底物终浓度1mmol，辅酶NADPH终浓度0.25mmol和适量酶液。具体反映为将缓冲液，底物和辅酶依次加入后30度保温2min，加入适量酶液后读取1min内的A340nm处的吸光值的下降。可是小弟在配置辅酶NADPH时出现了问题，先前是用100mmol/L磷酸钾缓冲液PH6.0配置的，第二天就没有吸光值了，查了相关帖子，说NADPH在磷酸钾缓冲液中不稳定，会氧化，有人说用Tris-HCL配置，可是反应体系是磷酸钾缓冲液PH6.0，不知会有影响么，还有NADPH缓冲液怎么保存，配置成母液么？急急急！ |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 一切只为明天 |
» 猜你喜欢
2026年面上项目中了，2A+B, 会评顺利通过
已经有12人回复
-
Suzuki偶联中硼酸酯原料掉下的硼酸酯是否可以自身偶联，生成B2Pin2杂质
已经有3人回复
-
大龄残疾硕士的一点执念
已经有19人回复
-
今年E04面上
已经有19人回复
-
刑法学论文投稿求助
已经有5人回复
-
Journal of Environmental Chemical Engineering
已经有3人回复
-
最后一年，祈求好运
已经有3人回复
-
风电环氧领域
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 环内酰胺的羰基还原
已经有6人回复
- 酵母菌中酶的分离提取
已经有9人回复
- 求助亚硝酸还原酶测定方法
已经有8人回复
- 活性污泥中硝酸还原酶和亚硝酸还原酶测定方法
已经有10人回复
- 不饱和酮的羰基的还原
已经有13人回复
- 羰基还原成氨基
已经有4人回复
- 还原酰胺羰基，保留酯羰基及后处理
已经有46人回复
- 酮(羰基)的还原氨化，做过的帮忙给点经验
已经有24人回复
- 羰基还原酶上DEAEsepharose柱后测酶活、比活力都明显降低，不知道什么原因
已经有5人回复
- 用硼烷将内酰胺羰基还原为亚甲基的问题
已经有31人回复
- 求助关于羰基还原的
已经有5人回复
- 请教还原羰基的试剂
已经有16人回复
- Pd/C可以把羰基还原成烷烃吗
已经有29人回复
- 急求！！植物叶片中硝酸还原酶、谷酰胺合成酶、天门冬酰胺合成酶活性的测定方法
已经有10人回复
- Raney镍能否将羰基还原为醇
已经有5人回复
- 求助 用三乙基硅将羰基还原成亚甲基
已经有6人回复
- 亲和层析blue sepharose 6 Fast Flow 纯化羰基还原酶的问题
已经有5人回复
- 求助羰基的还原
已经有12人回复
» 抢金币啦！回帖就可以得到:
-
辽宁惟则专利所2026年招聘公告（沈阳本地、有经验）
+1/175
-
中国医学科学院苏州系统医学研究所胡士斌课题组科研助理招聘
+1/46
-
以色列理工-生物质塑料等催化或多相反应方向2-3名---全奖博士研究生和科研助理
+2/42
-
上海交通大学化工学院邱惠斌教授课题组招募科研助理、交流生
+1/36
-
《穿越持科研神辅，杀懵外星万舰》第一章 洞中醒来是异人
+1/34
-
祈祷面上基金能中
+1/34
-
哈工大 化工学院招2026年秋季快速响应博士生，2027年3月或9月考核入学博士生
+1/32
-
四川大学华西医院高瞻课题组诚聘博后、博士/硕士生及科研助理 （柔性医疗电子）
+1/32
-
研究所招聘科研/实验助理一名
+1/28
-
澳大利亚昆士兰大学（UQ）】全奖PhD招生：碳捕集与液流电池储能方向
+1/12
-
澳大利亚科廷大学（Curtin University）招收全奖博士生3名
+1/10
-
力学研究所某专项团队支撑岗位和特别研究助理岗位招聘启事
+1/8
-
圣路易斯华盛顿大学管建均教授课题组招聘博士后（2名）
+1/5
-
重庆大学药学院沈宏城课题组招聘弘深青年教师/博士后
+1/5
-
华南理工大学国际校区博士后招聘（复合材料增材制造、柔性智能器件方向）
+1/4
-
面上成果交流
+4/4
-
中了，散尽金币
+1/4
-
圣路易斯华盛顿大学管建均教授课题组招聘博士后（2名）
+1/2
-
应聘机构化学教师，急用
+1/2
-
北京理工大学团簇研究团队招聘博士后 （化学+材料）
+1/1
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
史前五百年: 金币+10 2013-07-22 09:21:50
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
史前五百年: 金币+10 2013-07-22 09:21:50
我们实验室有人做的 一般缓冲液用tris-HCL 效果比钠盐与钾盐的缓冲液好一点 另外辅酶的话一般可以配成母液的 保存在-40度冰箱中 一般没问题的 不过注意用量最好不要长期保存 另外辅酶购买也要注意 有问题的更换厂家试试 因为好多公司的辅酶都是进口分装的 所以在这个过程可能会出现问题 如果不是反应体系的问题 就是辅酶本身的问题 保存不当或者厂家质量等其他原因 我们这边开反应出现过好多次问题 一般都在辅酶的原因  |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
史前五百年2楼2013-07-21 18:18:16
3楼2013-07-22 00:05:21
祝福，祝福，美好的未来在向你招手！！！
4楼2013-07-22 00:47:12
5楼2013-07-22 09:21:14
6楼2013-07-23 00:07:32
7楼2013-07-23 08:23:12
8楼2013-07-29 11:33:37
9楼2013-08-26 14:22:31
10楼2013-08-26 21:11:44