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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 有关羰基还原酶酶活测定中的几个问题
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史前五百年

金虫 (正式写手)

[交流] 有关羰基还原酶酶活测定中的几个问题

小弟做的是NADPH依赖型羰基还原酶，该酶在还原底物的过程中消耗NADPH。文献中测酶活是在A340nm处读到1min内的吸光度的降低的数值。反应总体系为250ul，包括100mmol/L磷酸钾缓冲液PH6.0，底物终浓度1mmol，辅酶NADPH终浓度0.25mmol和适量酶液。具体反映为将缓冲液，底物和辅酶依次加入后30度保温2min，加入适量酶液后读取1min内的A340nm处的吸光值的下降。可是小弟在配置辅酶NADPH时出现了问题，先前是用100mmol/L磷酸钾缓冲液PH6.0配置的，第二天就没有吸光值了，查了相关帖子，说NADPH在磷酸钾缓冲液中不稳定，会氧化，有人说用Tris-HCL配置，可是反应体系是磷酸钾缓冲液PH6.0，不知会有影响么，还有NADPH缓冲液怎么保存，配置成母液么？急急急！
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1楼 2013-07-19 09:44:51
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wswsjz

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
史前五百年: 金币+2 2013-07-22 09:21:42
祝福，祝福，美好的未来在向你招手！！！
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4楼2013-07-22 00:47:12
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