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tyslfzc

银虫 (初入文坛)

[求助] Ecoli 重组蛋白表达

想请教一下,用ecoli系统表达重组蛋白,两次expression的 cell 可以放在一起 进行后续纯化吗?就是lysis, 然后过各种affinity column/size exclusion column... 谢谢!
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ctt1984

木虫 (正式写手)

初学者

引用回帖:
10楼: Originally posted by tyslfzc at 2013-07-21 04:53:30
没有阿,我没有做任何检测,直接表达的,就是单纯是不同的colony...

一般我们构建克隆的时候测序对了才会转入到表达系统去表达;这时候就是把对了的质粒转入BL21中,之后涂板子挑选单克隆,之后扩大培养揺菌。
这一步我们一般都把摇好的菌保藏一批起来,如果后继实验无误的话就以保藏的菌液作为种子批,每次都取一点出来进行扩大培养。
如果你没这么干,每次挑平板上的进行揺菌,问题也不大,因为板子上克隆基本是都会表达你的蛋白,但是时间久了杂菌长出来了就完了。因此,最好保菌!
好好做事,踏实做人!
12楼2013-07-21 14:36:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
tyslfzc(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-16 13:56:53
如果只是为了纯化蛋白,可以合并细胞样品。
2楼2013-07-16 11:38:26
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zc10052157

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没问题啊   蛋白都是一样的
hold住
3楼2013-07-16 16:04:05
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tyslfzc

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-16 11:38:26
如果只是为了纯化蛋白,可以合并细胞样品。

可是两次cell里面自带的一些酶不会相互影响吗?我指至少在lysate之后?
我这么问是因为表达的时候,都要求pick single colony,因为有这些限制。
所以我才怀疑,后续有没有影响。
谢谢!
4楼2013-07-17 07:30:08
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