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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌原生质体
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499649610

金虫 (小有名气)

[求助] 细菌原生质体 已有2人参与

有没有哪位做过细菌原生质体转化的啊？我要制作菊欧文氏杆菌中（革兰氏阴性）的 原生质体，并且把一个质粒转移到菊欧文氏杆菌中（革兰氏阴性）。制备原生质体的时候用到的SSM溶液和再生培养的时候用的培养基都要加蔗糖，我能否用别的糖代替？因为我的质粒上含有蔗糖敏感基因！此外，如果有人做过，能否把转化的步骤和制作原生质体的步骤和注意事项也告知一下 ……谢！
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1楼 2013-07-15 17:16:51
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不识篼子

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

再生培养基也可以加入葡萄糖，一般还要加入渗透压稳定剂，以防止原生质体裂解而外泄。
制备原生质体需要加入：
溶菌酶，但是具体的浓度，反应温度及时间因菌而异，需要自己去摸索。
甘氨酸，有助于破壁，抑制胞壁的形成

我现在正在做这方面的工作，希望对你有帮助
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2楼2013-09-15 23:15:44
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ccdbaobao

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蔗糖可以用甘露醇来替换，浓度不变，而且再生率还会有所提高（文献中看到的）
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3楼2014-09-09 11:10:15
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ccdbaobao

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不识篼子 at 2013-09-15 23:15:44
再生培养基也可以加入葡萄糖，一般还要加入渗透压稳定剂，以防止原生质体裂解而外泄。
制备原生质体需要加入：
溶菌酶，但是具体的浓度，反应温度及时间因菌而异，需要自己去摸索。
甘氨酸，有助于破壁，抑制胞壁 ...

我也在做细菌原生质体的工作，但是原生质体一直无法再生，实验无法继续下去。不知能不能跟你讨论讨论，或者能否看一下你的实验方案，应该会对我有很大帮助，谢谢啦  我邮箱：scvx433@163.com
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4楼2014-09-09 11:13:09
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reborn1937

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ccdbaobao at 2014-09-09 11:13:09
我也在做细菌原生质体的工作，但是原生质体一直无法再生，实验无法继续下去。不知能不能跟你讨论讨论，或者能否看一下你的实验方案，应该会对我有很大帮助，谢谢啦  我邮箱：scvx433163.com...

请问你做什么的原生质体啊？我做大肠杆菌（革兰氏阴性菌）的原生质体，之前做得出来的，但最近一直做不出来了，想问问你用的是什么方法。可以交流下么？
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5楼2018-06-22 20:17:17
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reborn1937

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ccdbaobao at 2014-09-09 11:13:09
我也在做细菌原生质体的工作，但是原生质体一直无法再生，实验无法继续下去。不知能不能跟你讨论讨论，或者能否看一下你的实验方案，应该会对我有很大帮助，谢谢啦  我邮箱：scvx433163.com...

请问你是做什么细菌的原生质体啊？我做大肠杆菌的原生质体之前做得出来的现在一直不行了，想问问你是怎么做的？可以交流一下吗
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6楼2018-06-22 20:19:44
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三叶虫122

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

无法再生有可能生成原生质体时太彻底了，适当留有点薄壁有利于再生。原生质体之前能做后来不能做，一般找找酶的问题，失活的可能比较大，或者几种复合酶中的某个酶失活了，
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7楼2018-06-24 21:32:19
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