24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 2074  |  回复: 6

499649610

金虫 (小有名气)

[求助] 细菌原生质体 已有2人参与

有没有哪位做过细菌原生质体转化的啊?我要制作菊欧文氏杆菌中(革兰氏阴性)的 原生质体,并且把一个质粒转移到菊欧文氏杆菌中(革兰氏阴性)。制备原生质体的时候用到的SSM溶液和再生培养的时候用的培养基都要加蔗糖,我能否用别的糖代替?因为我的质粒上含有蔗糖敏感基因!此外,如果有人做过,能否把转化的步骤和制作原生质体的步骤和注意事项也告知一下 ……谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不识篼子

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

再生培养基也可以加入葡萄糖,一般还要加入渗透压稳定剂,以防止原生质体裂解而外泄。
制备原生质体需要加入:
溶菌酶,但是具体的浓度,反应温度及时间因菌而异,需要自己去摸索。
甘氨酸,有助于破壁,抑制胞壁的形成

我现在正在做这方面的工作,希望对你有帮助
2楼2013-09-15 23:15:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccdbaobao

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蔗糖可以用甘露醇来替换,浓度不变,而且再生率还会有所提高(文献中看到的)
3楼2014-09-09 11:10:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccdbaobao

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不识篼子 at 2013-09-15 23:15:44
再生培养基也可以加入葡萄糖,一般还要加入渗透压稳定剂,以防止原生质体裂解而外泄。
制备原生质体需要加入:
溶菌酶,但是具体的浓度,反应温度及时间因菌而异,需要自己去摸索。
甘氨酸,有助于破壁,抑制胞壁 ...

我也在做细菌原生质体的工作,但是原生质体一直无法再生,实验无法继续下去。不知能不能跟你讨论讨论,或者能否看一下你的实验方案,应该会对我有很大帮助,谢谢啦  我邮箱:scvx433@163.com
4楼2014-09-09 11:13:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reborn1937

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ccdbaobao at 2014-09-09 11:13:09
我也在做细菌原生质体的工作,但是原生质体一直无法再生,实验无法继续下去。不知能不能跟你讨论讨论,或者能否看一下你的实验方案,应该会对我有很大帮助,谢谢啦  我邮箱:scvx433163.com...

请问你做什么的原生质体啊?我做大肠杆菌(革兰氏阴性菌)的原生质体,之前做得出来的,但最近一直做不出来了,想问问你用的是什么方法。可以交流下么?
5楼2018-06-22 20:17:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

reborn1937

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ccdbaobao at 2014-09-09 11:13:09
我也在做细菌原生质体的工作,但是原生质体一直无法再生,实验无法继续下去。不知能不能跟你讨论讨论,或者能否看一下你的实验方案,应该会对我有很大帮助,谢谢啦  我邮箱:scvx433163.com...

请问你是做什么细菌的原生质体啊?我做大肠杆菌的原生质体之前做得出来的现在一直不行了,想问问你是怎么做的?可以交流一下吗
6楼2018-06-22 20:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三叶虫122

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

无法再生有可能生成原生质体时太彻底了,适当留有点薄壁有利于再生。原生质体之前能做后来不能做,一般找找酶的问题,失活的可能比较大,或者几种复合酶中的某个酶失活了,
7楼2018-06-24 21:32:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 499649610 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 裁员滚滚,退居二线 +3 J_wei 2026-05-10 3/150 2026-05-15 22:52 by molecula
[教师之家] 上海大学实验技术岗位非升即走 +4 嘻嘻哈哈乐呵呵 2026-05-15 4/200 2026-05-15 22:17 by waitnick
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 l7k6xnh0yc 2026-05-14 4/200 2026-05-15 17:43 by x0mp7owy2b
[论文投稿] 有带发论文的吗 +4 山楂之术 2026-05-09 4/200 2026-05-15 15:40 by 妹子不好惹
[文学芳草园] 风把牡丹吹跑了 +5 myrtle 2026-05-12 9/450 2026-05-15 15:27 by myrtle
[基金申请] 青C资助名额大幅增加! +11 西葫芦炒鸡蛋 2026-05-13 15/750 2026-05-15 14:36 by ambravo
[基金申请] 精华III评审感受-评审感受-评审感受 +14 ferrarichen 2026-05-11 18/900 2026-05-15 11:12 by cmhchen
[基金申请] 这年头没有找到涵评专家,还有中面上的可能吗 +9 dd921ww 2026-05-12 10/500 2026-05-15 10:41 by muyiliuhui
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cjf4bx70cj 2026-05-14 4/200 2026-05-15 09:03 by gagyerk94e
[教师之家] 教学课件你会给同学吗 +8 硕士研究生吗 2026-05-13 8/400 2026-05-14 22:23 by 常规沥青
[考博] 26应届毕业生考博求助 +3 wo一定上岸 2026-05-13 3/150 2026-05-14 21:47 by 明海天涯
[有机交流] 求助2,4-二氯-5-嘧啶甲醛的合成方法 20+3 光吃不拉 2026-05-14 5/250 2026-05-14 20:15 by 一切都是空工
[高分子] 本人最近太闲了,谁有问题可以提,每天会统一回复 +8 一切都是空工 2026-05-12 19/950 2026-05-14 20:03 by 一切都是空工
[考博] 申博自荐 +4 食品的橙子 2026-05-09 6/300 2026-05-14 16:05 by great1919
[考博] 材料类只有一篇综述能申博么 +4 乐逍遥谷 2026-05-13 4/200 2026-05-14 12:05 by zhyzzh
[基金申请] 请问大佬b0816评完了吗 +3 市民华南虎 2026-05-12 7/350 2026-05-14 07:41 by 市民华南虎
[硕博家园] 导师各种操作恶心咋办 +11 苍白的小青天 2026-05-09 13/650 2026-05-13 17:11 by 六两废铜
[论文投稿] 求助大佬sci投稿哪个好中 +3 江沅188 2026-05-12 4/200 2026-05-13 14:35 by 江沅188
[文学芳草园] 窗边初夏的小雨 +7 阿美_Lml888 2026-05-09 10/500 2026-05-12 15:27 by 阿美_Lml888
[考博] 现在不知道怎么办,感觉很痛苦 +4 qweww 2026-05-11 5/250 2026-05-11 20:23 by Oversize
信息提示
请填处理意见