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kabuqinuo89新虫 (小有名气)
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[求助]
原核表达 蛋白质全在沉淀里，这是怎么回事啊
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| 最近在做原核表达，但是破碎细胞后，上清中什么也没有，只有沉淀里有貌似是目的条带的蛋白，如果是形成包涵体的话量应该是很大的吧，可是我的蛋白量很少，而且全都在沉淀里，实在不知道该怎么解释，求助啊………… |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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1949stone
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4楼2013-07-12 08:05:02
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kabuqinuo89: 金币+2 2013-07-12 09:50:49
| 包涵体的形成不一定是蛋白表达量高才聚集形成的，有可能蛋白本身性质决定了它就是疏水性的，你后续要做什么试验？ |
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kabuqinuo892楼2013-07-11 22:27:12
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重组蛋白质形成包涵体的机理：1.重组蛋白质的表达过程中缺乏某些蛋白质折叠的辅助因子，而无法形成正确的次级键。2.外源基因合成太快，没有足够的时间进行折叠、二硫键的正确配对，同时可能有太多的蛋白质间的非特异性结合、蛋白质局部浓度高于溶解度。3.重组蛋白质的一级结构也与包涵体的形成有关，一般说含硫氨基酸氨基酸多的蛋白质可能易于形成包涵体，含脯氨酸多的蛋白质则明显的与形成包涵体的概率呈正相关，可能是因为脯氨酸破坏螺旋结构，而螺旋结构多位于蛋白质分子表面，有相对较强的机械强度，能够抑制蛋白质分子之间的彼此靠近和相互作用。4.重组蛋白质所处的环境可能不适宜蛋白质形成天然构象，发酵温度较高和pH接近重组蛋白质的等电点时比较容易形成包涵体。 综上述，重组蛋白质形成包涵体不一定需要绝对的巨大的表达量。 |
3楼2013-07-12 00:27:19
kabuqinuo89
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