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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 分子克隆实验指南 莫有提细菌DNA 的方法么？
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xmcxmyes

新虫 (小有名气)

[求助] 分子克隆实验指南 莫有提细菌DNA 的方法么？

分子克隆实验指南 莫有提细菌DNA 的方法么？
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1楼 2013-07-10 13:03:13
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电电的开始

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, good！ 2013-07-10 23:25:47
盐析法:
1、1.5ml对数期菌液
2、12000rpm 30 s
3、200ul裂解液（同CTAB/NaCl法），37c,1hr
4、66ul 5M NaCL,混匀充分，12000rpm 10min
5、上清用粗枪头取至新管
6、等体积酚充分混匀，12000rpm 3min，反复抽提至无蛋白层
7、取水层，等体积氯仿混匀，12000rpm 3min
8、上清至新管，2倍体积预冷无水乙醇
9、-20C，20min，14000rpm， 15min
10、400ul 70%冷乙醇洗涤
11、干燥，100ul 20ug/ml RNaseA，37C，30min
12、2倍体积无水乙醇沉淀，70%冷乙醇洗涤
13、干燥，溶于100ul TE
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为自己而开始
2楼2013-07-10 22:00:30
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lmhzy1987

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
分子克隆指南是基本操作，具体你还得看你提什么菌的DNA，有些细胞壁厚的难破的需要特殊处理，有的多糖多可能需要加入纯化步奏，不能一概而论，楼上给你的适用于细胞壁比较好破的
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头疼的文库
3楼2013-07-11 13:49:03
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刺猬独舞

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

飘过，准备学习，刚刚接触。。
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4楼2013-07-15 21:56:27
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xmcxmyes

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 电电的开始 at 2013-07-10 22:00:30
盐析法:
1、1.5ml对数期菌液
2、12000rpm 30 s
3、200ul裂解液（同CTAB/NaCl法），37c,1hr
4、66ul 5M NaCL,混匀充分，12000rpm 10min
5、上清用粗枪头取至新管
6、等体积酚充分混匀，12000rpm 3min，反复抽提 ...

这样提出来的DNA 质量高吗？可测全基因吗？我的是大肠
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5楼2014-02-24 02:48:13
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