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xmcxmyes

新虫 (小有名气)

[求助] 分子克隆实验指南 莫有提细菌DNA 的方法么?

分子克隆实验指南 莫有提细菌DNA 的方法么?
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电电的开始

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+5, good! 2013-07-10 23:25:47
盐析法:
1、1.5ml对数期菌液
2、12000rpm 30 s
3、200ul裂解液(同CTAB/NaCl法),37c,1hr
4、66ul 5M NaCL,混匀充分,12000rpm 10min
5、上清用粗枪头取至新管
6、等体积酚充分混匀,12000rpm 3min,反复抽提至无蛋白层
7、取水层,等体积氯仿混匀,12000rpm 3min
8、上清至新管,2倍体积预冷无水乙醇
9、-20C,20min,14000rpm, 15min
10、400ul 70%冷乙醇洗涤
11、干燥,100ul 20ug/ml RNaseA,37C,30min
12、2倍体积无水乙醇沉淀,70%冷乙醇洗涤
13、干燥,溶于100ul TE
为自己而开始
2楼2013-07-10 22:00:30
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lmhzy1987

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
分子克隆指南是基本操作,具体你还得看你提什么菌的DNA,有些细胞壁厚的难破的需要特殊处理,有的多糖多可能需要加入纯化步奏,不能一概而论,楼上给你的适用于细胞壁比较好破的
头疼的文库
3楼2013-07-11 13:49:03
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刺猬独舞

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

飘过,准备学习,刚刚接触。。
4楼2013-07-15 21:56:27
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xmcxmyes

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 电电的开始 at 2013-07-10 22:00:30
盐析法:
1、1.5ml对数期菌液
2、12000rpm 30 s
3、200ul裂解液(同CTAB/NaCl法),37c,1hr
4、66ul 5M NaCL,混匀充分,12000rpm 10min
5、上清用粗枪头取至新管
6、等体积酚充分混匀,12000rpm 3min,反复抽提 ...

这样提出来的DNA 质量高吗?可测全基因吗?我的是大肠
5楼2014-02-24 02:48:13
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