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关于基因表达
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| 自己克隆了一个植物基因，现在想在大肠感觉中表达它。但是不知道要怎么设计表达时用的引物？酶切位点怎么加？怎么考虑移码问题？准备选用peT30b作为表达载体，BL21为宿主菌，同时分析我的序列和载体序列及实验室情况，准备选择BamHI和NotI做双酶切，现在不知道酶切位点要怎么加在引物上，请各位大侠帮忙，谢谢！ |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
孙妙妙: 金币+2, ★有帮助, 谢谢，最起码有一点明白了 2013-07-09 19:35:08
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-07-09 21:31:33
1949stone: 回帖置顶 2013-07-10 08:38:28
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我前段时间也在研究这个问题，在此说一下我的经验， 按2楼说的，可在上下游引物的5'端各加一个酶切位点，同时最好保护碱基，具体数目你可以下载相关资料来看，这样PRC后就可以在目的片段上加上酶切位点了。到时用这两个酶来分别对载体和目的片段双酶切，回收纯化，再连接，转化，测序判断是否连接正确，再进行表达。 你可以先借助软件，如Vector NTI来分析一下是否移码的问题，你需研究下你的表达载体是从哪里开始翻译的，然后，插入你的目的片段后，从载体翻译的起始按三个碱基来分析一下你的CDS区有无移码，没有就好。 有大牛觉得我的说法不对的，欢迎指出并一起交流。 |
3楼2013-07-09 18:43:18
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charles08
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