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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于免疫共沉淀
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小核桃小

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于免疫共沉淀 已有2人参与

我最近在做免疫共沉淀，文献上面看到做出来的图片各异。我的目的是做两个蛋白之间有无相互作用，估且称A和B蛋白吧，我自认为出的图应该是四个条带，如图（CO-IP后的WB图片，input跑两个泳道是为了证明总蛋白里面既有A，又有B蛋白）。假设我用A作为一抗，如果A和B之间有相互作用，那么后面WB分析，在INPUT里面和CO-IP里B处均出现条带，而conrto IgG阴性条带。不知道我理解的对不对，图片应不应该是这个样子，我画了一个模拟图，请大家帮忙分析一下。
关于免疫共沉淀
IMG_1224.JPG
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呆呆的呆呆
1楼 2013-07-07 10:22:20
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小核桃小

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 遥控器68 at 2013-07-09 15:31:11
也许是我理解你的图不到位。想问一下：不知道用A做一抗，为何会AB都在一张膜上同时单独有抗到，如果是AB结合的情况倒是可能，且抗到的A-B会比单独的A or B分子量大些（说到底我是不明白你俩input是怎么回事）。
主 ...

看来你没懂这个CO-IP怎么做。先提总蛋白，分成三份，其中一份，是input. 一份用做CO-IP,一份用做Control.input我之所以要在后面做WB验证的时候，跑两个孔，是想证明，这个总蛋白里，既有我的A蛋白，也有我的B蛋白。CO-IP那份，用A作为一抗，如果它与B有相互作用，那么随后的WB中B蛋白肯定会出现条带，Control组就是用的与这两个蛋白无关的抗体做的。不知道这样解释你能不能理解？
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呆呆的呆呆
10楼2013-07-09 21:58:25
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遥控器68

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-08 16:28:55
理论图不靠谱的， 实际上还要根据你的目的蛋白C和与目的蛋白作用的蛋白D的特点来看。理论上应只有CD出现，但实际上很少能做到，可能C和很多别的蛋白都出现了，却没找到D。C若是个蛋白家族成员，成员间都很相似，那么麻烦就一打一打儿的多啦，可能沉淀出来一堆C1C2C...和D1D2D...
所以想去的理想效果，保证C的专一性，另外根据IP的特点考虑实验可能结果。
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4楼2013-07-08 12:49:34
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主没错, 建议楼主在跑蛋白胶的时候把control放在input和IP之间(你不想别人找茬说IP的信号是点样的时候从input那边溢过去的, 对吧?)
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7楼2013-07-09 01:02:00
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darkarrow

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
图没问题，但是最好能够同时也用B作为抗体去拉A以确认结果。
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8楼2013-07-09 03:20:15
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开开心心520

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小核桃小 at 2013-07-09 21:58:25
看来你没懂这个CO-IP怎么做。先提总蛋白，分成三份，其中一份，是input. 一份用做CO-IP,一份用做Control.input我之所以要在后面做WB验证的时候，跑两个孔，是想证明，这个总蛋白里，既有我的A蛋白，也有我的B蛋白。 ...

按照楼主的做法，最后用B的抗体做WB，蛋白的分子量应该是B的分子量还是A+B的分子量呢？
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12楼2013-08-29 10:26:08
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普通回帖

zhouking8758

木虫 (正式写手)
★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-08 16:28:46
先说明一下，我没做过co-ip。但是楼主的图应该就是理论上的结果。
欢迎各位来发表看法啊
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2楼2013-07-07 21:30:19
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loudbing

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
3楼2013-07-08 10:55:04
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小核桃小

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by loudbing at 2013-07-08 10:55:04
可以加一个上清里的图

什么上清里的图？
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呆呆的呆呆
5楼2013-07-08 22:59:54
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小核桃小

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 遥控器68 at 2013-07-08 12:49:34
理论图不靠谱的， 实际上还要根据你的目的蛋白C和与目的蛋白作用的蛋白D的特点来看。理论上应只有CD出现，但实际上很少能做到，可能C和很多别的蛋白都出现了，却没找到D。C若是个蛋白家族成员，成员间都很相似，那么 ...

那我理解的是对的咯？我现在就想知道理论上做出来是不是应该这样？
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呆呆的呆呆
6楼2013-07-08 23:00:29
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遥控器68

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小核桃小 at 2013-07-08 23:00:29
那我理解的是对的咯？我现在就想知道理论上做出来是不是应该这样？...

也许是我理解你的图不到位。想问一下：不知道用A做一抗，为何会AB都在一张膜上同时单独有抗到，如果是AB结合的情况倒是可能，且抗到的A-B会比单独的A or B分子量大些（说到底我是不明白你俩input是怎么回事）。
主要做的是用anti-B得到和A作用的B带，A的wb结果或其他方法均只是证明A抗专一性和特异性。而重要的是B抗体的结果。
不知是否对题。
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9楼2013-07-09 15:31:11
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