【答案】应助回帖

呆呆的呆呆

1楼2013-07-07 10:22:20

回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

小核桃小

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 245.5
帖子: 19
在线: 5.9小时
虫号: 1569610
注册: 2012-01-08
性别: MM
专业: 炎症、感染与免疫

引用回帖:

9楼: Originally posted by 遥控器68 at 2013-07-09 15:31:11
也许是我理解你的图不到位。想问一下：不知道用A做一抗，为何会AB都在一张膜上同时单独有抗到，如果是AB结合的情况倒是可能，且抗到的A-B会比单独的A or B分子量大些（说到底我是不明白你俩input是怎么回事）。
主 ...

看来你没懂这个CO-IP怎么做。先提总蛋白，分成三份，其中一份，是input. 一份用做CO-IP,一份用做Control.input我之所以要在后面做WB验证的时候，跑两个孔，是想证明，这个总蛋白里，既有我的A蛋白，也有我的B蛋白。CO-IP那份，用A作为一抗，如果它与B有相互作用，那么随后的WB中B蛋白肯定会出现条带，Control组就是用的与这两个蛋白无关的抗体做的。不知道这样解释你能不能理解？

赞一下(2人)

呆呆的呆呆

10楼2013-07-09 21:58:25

遥控器68

金虫 (小有名气)

应助: 17 (小学生)
金币: 900.2
散金: 50
红花: 2
帖子: 197
在线: 41.4小时
虫号: 1958999
注册: 2012-08-27
性别: MM
专业: 植物生理与生化

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-08 16:28:55

理论图不靠谱的，实际上还要根据你的目的蛋白C和与目的蛋白作用的蛋白D的特点来看。理论上应只有CD出现，但实际上很少能做到，可能C和很多别的蛋白都出现了，却没找到D。C若是个蛋白家族成员，成员间都很相似，那么麻烦就一打一打儿的多啦，可能沉淀出来一堆C1C2C...和D1D2D...
所以想去的理想效果，保证C的专一性，另外根据IP的特点考虑实验可能结果。

4楼2013-07-08 12:49:34

bullfrog325

木虫 (正式写手)

BioEPI: 1
应助: 193 (高中生)
金币: 2880.3
散金: 200
红花: 24
帖子: 744
在线: 269.5小时
虫号: 1864929
注册: 2012-06-20

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

楼主没错, 建议楼主在跑蛋白胶的时候把control放在input和IP之间(你不想别人找茬说IP的信号是点样的时候从input那边溢过去的, 对吧?)

7楼2013-07-09 01:02:00

darkarrow

新虫 (初入文坛)

BioEPI: 1
应助: 7 (幼儿园)
金币: 73.8
红花: 1
帖子: 28
在线: 5.9小时
虫号: 2324932
注册: 2013-03-06
专业: 蛋白质组学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

图没问题，但是最好能够同时也用B作为抗体去拉A以确认结果。

8楼2013-07-09 03:20:15

开开心心520

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1821.2
散金: 35
帖子: 143
在线: 35.9小时
虫号: 2508012
注册: 2013-06-14
专业: 细胞生物学研究中的新方法

引用回帖:

10楼: Originally posted by 小核桃小 at 2013-07-09 21:58:25
看来你没懂这个CO-IP怎么做。先提总蛋白，分成三份，其中一份，是input. 一份用做CO-IP,一份用做Control.input我之所以要在后面做WB验证的时候，跑两个孔，是想证明，这个总蛋白里，既有我的A蛋白，也有我的B蛋白。 ...

按照楼主的做法，最后用B的抗体做WB，蛋白的分子量应该是B的分子量还是A+B的分子量呢？

12楼2013-08-29 10:26:08

普通回帖

zhouking8758

木虫 (正式写手)

应助: 18 (小学生)
金币: 2418.5
散金: 27
红花: 2
帖子: 369
在线: 289.9小时
虫号: 691834
注册: 2009-01-12
专业: 生物大分子结构与功能

★
137167741: 金币+1, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-07-08 16:28:46

先说明一下，我没做过co-ip。但是楼主的图应该就是理论上的结果。
欢迎各位来发表看法啊

2楼2013-07-07 21:30:19

loudbing

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

3楼2013-07-08 10:55:04

小核桃小

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 245.5
帖子: 19
在线: 5.9小时
虫号: 1569610
注册: 2012-01-08
性别: MM
专业: 炎症、感染与免疫

引用回帖:

3楼: Originally posted by loudbing at 2013-07-08 10:55:04
可以加一个上清里的图

什么上清里的图？

呆呆的呆呆

5楼2013-07-08 22:59:54

小核桃小

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 245.5
帖子: 19
在线: 5.9小时
虫号: 1569610
注册: 2012-01-08
性别: MM
专业: 炎症、感染与免疫

引用回帖:

4楼: Originally posted by 遥控器68 at 2013-07-08 12:49:34
理论图不靠谱的，实际上还要根据你的目的蛋白C和与目的蛋白作用的蛋白D的特点来看。理论上应只有CD出现，但实际上很少能做到，可能C和很多别的蛋白都出现了，却没找到D。C若是个蛋白家族成员，成员间都很相似，那么 ...

那我理解的是对的咯？我现在就想知道理论上做出来是不是应该这样？

呆呆的呆呆

6楼2013-07-08 23:00:29

遥控器68

金虫 (小有名气)

应助: 17 (小学生)
金币: 900.2
散金: 50
红花: 2
帖子: 197
在线: 41.4小时
虫号: 1958999
注册: 2012-08-27
性别: MM
专业: 植物生理与生化

引用回帖:

6楼: Originally posted by 小核桃小 at 2013-07-08 23:00:29
那我理解的是对的咯？我现在就想知道理论上做出来是不是应该这样？...

也许是我理解你的图不到位。想问一下：不知道用A做一抗，为何会AB都在一张膜上同时单独有抗到，如果是AB结合的情况倒是可能，且抗到的A-B会比单独的A or B分子量大些（说到底我是不明白你俩input是怎么回事）。
主要做的是用anti-B得到和A作用的B带，A的wb结果或其他方法均只是证明A抗专一性和特异性。而重要的是B抗体的结果。
不知是否对题。

9楼2013-07-09 15:31:11