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小核桃小

银虫 (初入文坛)

[求助] 关于免疫共沉淀已有2人参与

我最近在做免疫共沉淀,文献上面看到做出来的图片各异。我的目的是做两个蛋白之间有无相互作用,估且称A和B蛋白吧,我自认为出的图应该是四个条带,如图(CO-IP后的WB图片,input跑两个泳道是为了证明总蛋白里面既有A,又有B蛋白)。假设我用A作为一抗,如果A和B之间有相互作用,那么后面WB分析,在INPUT里面和CO-IP里B处均出现条带,而conrto IgG阴性条带。不知道我理解的对不对,图片应不应该是这个样子,我画了一个模拟图,请大家帮忙分析一下。
关于免疫共沉淀
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呆呆的呆呆
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开开心心520

木虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 小核桃小 at 2013-07-09 21:58:25
看来你没懂这个CO-IP怎么做。先提总蛋白,分成三份,其中一份,是input. 一份用做CO-IP,一份用做Control.input我之所以要在后面做WB验证的时候,跑两个孔,是想证明,这个总蛋白里,既有我的A蛋白,也有我的B蛋白。 ...

按照楼主的做法,最后用B的抗体做WB,蛋白的分子量应该是B的分子量还是A+B的分子量呢?
12楼2013-08-29 10:26:08
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查看全部 18 个回答

zhouking8758

木虫 (正式写手)


137167741: 金币+1, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-07-08 16:28:46
先说明一下,我没做过co-ip。但是楼主的图应该就是理论上的结果。
欢迎各位来发表看法啊
2楼2013-07-07 21:30:19
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loudbing

禁虫 (初入文坛)

本帖内容被屏蔽

3楼2013-07-08 10:55:04
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遥控器68

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
137167741: 金币+2, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-07-08 16:28:55
理论图不靠谱的, 实际上还要根据你的目的蛋白C和与目的蛋白作用的蛋白D的特点来看。理论上应只有CD出现,但实际上很少能做到,可能C和很多别的蛋白都出现了,却没找到D。C若是个蛋白家族成员,成员间都很相似,那么麻烦就一打一打儿的多啦,可能沉淀出来一堆C1C2C...和D1D2D...
所以想去的理想效果,保证C的专一性,另外根据IP的特点考虑实验可能结果。
4楼2013-07-08 12:49:34
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