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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

MolEPI: 1
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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cnb1987(kx444555代发): 金币+5, 鼓励交流 2013-07-06 17:20:36
gyesang: MolEPI+1, 很好！ 2013-08-04 00:44:39

如果你是用RNA反转录得到cDNA后扩增还得到带内含子的序列，那么建议你做两点试试：1 设计跨内含子的引物重新从扩增；2 RNA中可能有DNA污染，建议用DNA消化酶消化一下，再反转录扩增，或者用一些本身有DNAase I试剂的RT-PCR试剂盒，在反转录时直接加入，方便、简单、快捷。因为往往你去DNA时，对你的样品又是一损失，可咨询下宝生物的技术人员，那里有相关的试剂盒。

估计你扩增得到的序列比你用来设计引物的模版序列长吧？当你去掉内含子后，或许你会发现，匹配度很高。含有内含子，往往就会出现有TGA等终止密码子，因此，你分析的ORF是断续的。
如果你的剪切体是包含有完整的CDS，那么当你的剪切体去掉内含子后，把它翻译成蛋白，直接在蛋白数据库里去比对，你可以大致知道蛋白的功能。