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[交流]
噬菌体展示肽库淘选
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我现在在做噬菌体展示，遇到了如下几个问题： 1.我开始做的时候第三轮时突然没有了蓝斑，我第一开始认为是污染了，可是当我重新铺板挑单菌落然后摇菌后，蓝斑又神奇的出现了。我想问，是不是每次都要重新挑菌然后摇菌才能使用，大家一般要多长时间呢？（PS：我用的菌是NEB的7肽和12肽的试剂盒中给的菌，学姐说这个给的菌没有他以前做的活力好） 2.IPTG/Xgal是每次都要现用现配的么？ 3.我曾经稀释过扩增后的噬菌体，可是效果跟我没有稀释的时候没有太大差别。所以我一直都没有稀释，而且最多我也就稀释10倍，100倍，1000倍。想学习一下大家的经验~ 4.每次我用菌铺板后测滴度后，板上都会涨满了菌，所以我就把200μL改成了100μL，60μL，50μL，结果并没有好很多，还是一大片一大片的不规则蓝斑，很难穿刺~我想询问一下大家测滴度是什么样的呢，大家使用的是200μL的菌么？ 5.还有我穿刺了四个蓝色的菌斑以后去测序，却测不出来。我曾经给客服联系，他说有篮板就应该有东西，就应该测到，他说要我去问测序公司原因，如果量太少就增加量，而且换一家好的测序公司。目前我们不可能换测序公司，而且他并没有说明什么原因。我只能从自己这里找原因，有可能是：我把菌降低到60μL的原因么？还是我的测滴度的板子培养的时间过长，我每次都不超过18H。希望有经验的人能指点一下？ 感谢大家看完我的帖子，也希望有同做噬菌体的研究朋友交流一下，因为这个试验周期很长，我一般都是7个肽的做四轮，取三四轮，12个肽的做五轮，取四五轮，所以希望大家能互相交流，把实验做得更好，谢谢  |
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