应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 705  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

crjtina

银虫 (小有名气)

[求助] PCR的问题

做的PCR也长出克隆，但是测序时出现这样的问题：把我的设计的引物段查找出现是一段正确的，但是比如我的引物设计28个碱基，如果输入20个左右甚至27个时，都会出现两段甚至四段。请问这是什么原因呢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢
赠人玫瑰，手有余香。
1楼 2013-06-24 17:03:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crjtina

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-24 21:32:55
是不是聚合酶的活性太低了，可能没没有保存好，或者放的时间太久了，换种酶试试看；引物是不是可能自身形成了发夹结构，导致只有一部分引物与模板DNA单链 接和了；把引物末端换成G或者C结尾；引物序列中的G和C太少了 ...

同一批突变的聚合酶，而且一直用的突变的酶是同一种酶，G+C含量大于40%，回头我再检验下引物问题，谢谢啦
赞一下 回复此楼
赠人玫瑰，手有余香。
5楼2013-06-25 08:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
crjtina: 金币+1, ★有帮助 2013-06-25 08:26:49
可能是引物特异性不高，扩增时候提高温度可能会好点，pcr用来测序要用高保真酶
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-06-24 18:01:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-24 21:33:13
crjtina: 金币+2, ★有帮助 2013-06-25 08:26:38
是不是聚合酶的活性太低了，可能没没有保存好，或者放的时间太久了，换种酶试试看；引物是不是可能自身形成了发夹结构，导致只有一部分引物与模板DNA单链 接和了；把引物末端换成G或者C结尾；引物序列中的G和C太少了，低于40%。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-06-24 21:32:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crjtina

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-06-24 18:01:30
可能是引物特异性不高，扩增时候提高温度可能会好点，pcr用来测序要用高保真酶

谢谢啊，温度有95度了，测序是交给公司测的，之前没问题
赞一下 回复此楼
赠人玫瑰，手有余香。
4楼2013-06-25 08:23:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 302求调剂一志愿华中师范大学 +3 小江小江江江 2026-04-02 3/150 2026-04-02 13:20 by syh9288
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 13:03 by yulian1987
[考研] 一志愿085600中科院宁波所276分求调剂 +24 材料学257求调剂 2026-03-28 25/1250 2026-04-02 11:27 by -迷了路啊路
[考研] 329求调剂 +8 miaodesi 2026-04-02 10/500 2026-04-02 10:24 by 不吃魚的貓
[考研] 311求调剂 +16 zchqwer 2026-04-01 18/900 2026-04-02 10:15 by 不吃魚的貓
[考研] 342求调剂 +12 Mary Keen 2026-03-28 13/650 2026-04-01 21:02 by 流情牧豪
[考研] 求调剂0703 +5 周嘉尧 2026-03-31 8/400 2026-04-01 20:32 by ltltkkk
[考研] 290求调剂 +5 dfffsar 2026-03-29 5/250 2026-04-01 19:45 by 6781022
[考研] 309求调剂 +19 谁不是少年 2026-03-29 19/950 2026-04-01 15:47 by jp9609
[考研] 调剂 +5 好好读书。 2026-03-28 7/350 2026-04-01 15:32 by 王亮_大连医科大
[考研] 322求调剂 +8 三水sss 2026-04-01 8/400 2026-04-01 10:19 by 唐沐儿
[考研] 288资源与环境专硕求调剂，不限专业，有学上就行 +25 lllllos 2026-03-30 26/1300 2026-04-01 09:52 by 一只好果子?
[考研] 考研材料工程351分调剂 +5 整个好的 2026-03-31 5/250 2026-04-01 09:36 by topgun2009
[有机交流] 甲基亚磺磺酸钠和甲基磺酸酯反应机理 10+3 kaobao456 2026-03-29 4/200 2026-03-30 23:16 by nBu锂
[考研] 求调剂 +7 青春裁为三截 2026-03-29 7/350 2026-03-30 13:14 by laoshidan
[考研] 291求调剂 +5 Y-cap 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:18 by mumin1990
[考研] 086000生物与医药调剂 +5 Feisty。 2026-03-28 9/450 2026-03-29 12:02 by longlotian
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
[考研] 340求调剂 +5 jhx777 2026-03-27 5/250 2026-03-28 04:18 by fmesaito
[考研] 292求调剂 +4 求求了收下我吧� 2026-03-26 4/200 2026-03-27 10:37 by zhshch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭