应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 703  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

crjtina

银虫 (小有名气)

[求助] PCR的问题

做的PCR也长出克隆，但是测序时出现这样的问题：把我的设计的引物段查找出现是一段正确的，但是比如我的引物设计28个碱基，如果输入20个左右甚至27个时，都会出现两段甚至四段。请问这是什么原因呢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢
赠人玫瑰，手有余香。
1楼 2013-06-24 17:03:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crjtina

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-24 21:32:55
是不是聚合酶的活性太低了，可能没没有保存好，或者放的时间太久了，换种酶试试看；引物是不是可能自身形成了发夹结构，导致只有一部分引物与模板DNA单链 接和了；把引物末端换成G或者C结尾；引物序列中的G和C太少了 ...

同一批突变的聚合酶，而且一直用的突变的酶是同一种酶，G+C含量大于40%，回头我再检验下引物问题，谢谢啦
赞一下 回复此楼
赠人玫瑰，手有余香。
5楼2013-06-25 08:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
crjtina: 金币+1, ★有帮助 2013-06-25 08:26:49
可能是引物特异性不高，扩增时候提高温度可能会好点，pcr用来测序要用高保真酶
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-06-24 18:01:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-24 21:33:13
crjtina: 金币+2, ★有帮助 2013-06-25 08:26:38
是不是聚合酶的活性太低了，可能没没有保存好，或者放的时间太久了，换种酶试试看；引物是不是可能自身形成了发夹结构，导致只有一部分引物与模板DNA单链 接和了；把引物末端换成G或者C结尾；引物序列中的G和C太少了，低于40%。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-06-24 21:32:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crjtina

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-06-24 18:01:30
可能是引物特异性不高，扩增时候提高温度可能会好点，pcr用来测序要用高保真酶

谢谢啊，温度有95度了，测序是交给公司测的，之前没问题
赞一下 回复此楼
赠人玫瑰，手有余香。
4楼2013-06-25 08:23:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0856初试324分求调剂 +6 想上学求调 2026-04-01 6/300 2026-04-02 11:42 by 星空星月
[考研] 319求调剂 +13 太容易1018 2026-04-01 13/650 2026-04-02 11:39 by Sammy2
[考研] 265求调剂 +8 林深温澜 2026-04-01 10/500 2026-04-02 11:35 by Sammy2
[考研] 266分，一志愿电气工程，本科材料，求材料专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-04-01 11/550 2026-04-02 11:31 by lnilvy
[考研] 求调剂！生物与医药专硕 +3 逆转陆先生 2026-04-01 3/150 2026-04-02 09:02 by Jaylen.
[考研] 调剂推荐 +10 清酒714 2026-03-26 12/600 2026-04-02 07:57 by 尚水阁主
[考研] 318求调剂，计算材料方向 +7 吸喵有害笙命 2026-04-01 8/400 2026-04-01 23:54 by 义文wang
[考研] 304求调剂 +12 素年祭语 2026-03-31 15/750 2026-04-01 22:41 by peike
[考研] 285求调剂 +7 AZMK 2026-03-30 13/650 2026-04-01 17:00 by 七度不信任
[考研] 找调剂 +5 楚乔乔 2026-04-01 5/250 2026-04-01 16:12 by w虫虫123
[考研] 0703一志愿南师大334求调剂 +4 seven7yu 2026-03-30 4/200 2026-04-01 16:10 by oooqiao
[考研] 348求调剂 +9 zzzzyk123 2026-04-01 9/450 2026-04-01 14:24 by w虫虫123
[考研] 085600，321分求调剂 +13 大馋小子 2026-03-31 13/650 2026-04-01 12:35 by chemdavid
[考研] 277跪求调剂 +8 1915668 2026-03-27 13/650 2026-03-31 14:58 by 王亮_大连医科大
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等调剂 +8 哇呼哼呼哼 2026-03-27 10/500 2026-03-31 13:35 by Huaxue_Wang
[考研] 328求调剂 +8 嗯滴的基本都 2026-03-27 8/400 2026-03-30 17:20 by Wang200018
[考研] 考研调剂 +5 Sanmu-124 2026-03-26 5/250 2026-03-30 13:36 by chemdavid
[考研] 332求92调剂 +8 蕉蕉123 2026-03-28 8/400 2026-03-29 10:46 by 周梓丹
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-26 4/200 2026-03-27 08:04 by chemisry
[考研] 085602化学工程求调剂。 +4 平乐乐乐 2026-03-26 4/200 2026-03-26 17:57 by fmesaito
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭