应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 700  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

crjtina

银虫 (小有名气)

[求助] PCR的问题

做的PCR也长出克隆，但是测序时出现这样的问题：把我的设计的引物段查找出现是一段正确的，但是比如我的引物设计28个碱基，如果输入20个左右甚至27个时，都会出现两段甚至四段。请问这是什么原因呢
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢
赠人玫瑰，手有余香。
1楼 2013-06-24 17:03:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crjtina

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-06-24 18:01:30
可能是引物特异性不高，扩增时候提高温度可能会好点，pcr用来测序要用高保真酶

谢谢啊，温度有95度了，测序是交给公司测的，之前没问题
赞一下 回复此楼
赠人玫瑰，手有余香。
4楼2013-06-25 08:23:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
crjtina: 金币+1, ★有帮助 2013-06-25 08:26:49
可能是引物特异性不高，扩增时候提高温度可能会好点，pcr用来测序要用高保真酶
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-06-24 18:01:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-24 21:33:13
crjtina: 金币+2, ★有帮助 2013-06-25 08:26:38
是不是聚合酶的活性太低了，可能没没有保存好，或者放的时间太久了，换种酶试试看；引物是不是可能自身形成了发夹结构，导致只有一部分引物与模板DNA单链 接和了；把引物末端换成G或者C结尾；引物序列中的G和C太少了，低于40%。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-06-24 21:32:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crjtina

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-24 21:32:55
是不是聚合酶的活性太低了，可能没没有保存好，或者放的时间太久了，换种酶试试看；引物是不是可能自身形成了发夹结构，导致只有一部分引物与模板DNA单链 接和了；把引物末端换成G或者C结尾；引物序列中的G和C太少了 ...

同一批突变的聚合酶，而且一直用的突变的酶是同一种酶，G+C含量大于40%，回头我再检验下引物问题，谢谢啦
赞一下 回复此楼
赠人玫瑰，手有余香。
5楼2013-06-25 08:26:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂 +4 薛定谔的虎。 2026-04-01 4/200 2026-04-01 22:56 by wxiongid
[考研] 材料求调剂 +7 呢呢妮妮 2026-04-01 7/350 2026-04-01 22:26 by lemonade0702
[考研] 食品学硕362求调剂 +3 xuanxianxian 2026-04-01 3/150 2026-04-01 21:05 by 啊李999
[考研] 337求调剂 +9 《树》 2026-03-29 9/450 2026-04-01 18:05 by 记事本2026
[考研] 314求调剂 +4 溪云珂 2026-03-26 4/200 2026-04-01 17:00 by oooqiao
[考研] 311求调剂 +10 李芷新1 2026-03-31 10/500 2026-04-01 14:38 by chenqifeng666
[考研] 349求调剂 +6 zwjjjjjj 2026-03-31 6/300 2026-04-01 09:16 by JourneyLucky
[考研] 初试301，代码085701环境工程，本硕一致，四六级已过，有二区一作，共发表5篇论文 +3 axibli 2026-04-01 3/150 2026-04-01 08:43 by i_cooler
[考研] 277跪求调剂 +8 1915668 2026-03-27 13/650 2026-03-31 14:58 by 王亮_大连医科大
[考研] 272求调剂，接受跨专业调剂！ +3 闲鱼卢 2026-03-31 3/150 2026-03-31 13:00 by 替代品000
[考研] 287求调剂 +17 land xuxu 2026-03-26 17/850 2026-03-31 11:16 by Zzxxxs
[考研] 266分，求材料相关专业调剂 +10 哇呼哼呼哼 2026-03-30 12/600 2026-03-31 11:00 by 熊一刀
[考研] 282求调剂 +3 呼吸都是减肥 2026-03-31 3/150 2026-03-31 10:00 by wangjy2002
[考研] 本科211总分289，08工学真心求调剂 +3 utopiaE 2026-03-30 3/150 2026-03-30 23:42 by ms629
[考研] 求调剂 +7 青春裁为三截 2026-03-29 7/350 2026-03-30 13:14 by laoshidan
[考研] 279求调剂 +4 蝶舞轻绕 2026-03-29 4/200 2026-03-29 09:45 by laoshidan
[考研] 085600，专业课化工原理，321分求调剂 +5 大馋小子 2026-03-28 5/250 2026-03-29 08:56 by qingfeng258
[考研] 调剂考研 +3 王杰一 2026-03-29 3/150 2026-03-29 08:09 by fmesaito
[考研] 394求调剂 +3 好事多磨静候佳� 2026-03-26 5/250 2026-03-28 14:24 by 唐沐儿
[考研] 打过很多竞赛，085406控制工程300分，求调剂 +3 askeladz 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:08 by 给你你注意休息
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭