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[求助]
木聚糖酶纯化分离
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有做木聚糖酶的吗，我的酶硫酸铵沉淀后有活性，但是用透析袋透析后活性大幅降低，无法往后做分离纯化活性跟踪，请各位大侠出招相助，万分感谢······· [ Last edited by 笨笨小张 on 2013-6-22 at 18:44 ] |
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 蛋白质生物学实验经验 |
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5楼2013-06-25 00:37:38
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【答案】应助回帖
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最简单的方法：用木聚糖酶的专一性配体作为配体制备成亲和层析柱，进行亲和层析。 1.木聚糖酶的专一性配体可以是其底物，木聚糖酶肯定能够与其底物结合并且发生反应，有两个改进办法：（1）替换掉底物的个别侧链基团，或者在侧链基团上共价结合小的基团，阻止催化反应，但是能够专一性结合酶；（2）降低温度，不要到冰点，比如4度，减慢催化反应。因此，可以用木聚糖酶的底物或者底物的修饰化合物作为配体制备成亲和层析柱，进行亲和层析。 2.木聚糖酶的专一性配体也可以是其底物的竞争性抑制剂，竞争性抑制剂不一定就是与底物直接竞争酶的活性中心，但是反正竞争性抑制剂在有没有底物存在时都能与木聚糖酶专一性结合，这就够了！因此，可以用木聚糖酶的竞争性抑制剂作为配体制备成亲和层析柱，进行亲和层析。 |
4楼2013-06-25 00:35:53
