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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr产物为什么比我设计的长的多
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cgh20031695

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr产物为什么比我设计的长的多

我的目标基因200bp左右，从两端选取了碱基作为引物，为什么P出来却有300bp，且除了引物都不是我要的？求各位大侠指点，苦恼中。
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1楼 2013-06-20 17:51:40
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zhaodahe

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-29 20:08:50
你这是没扩增出来，或者特异性不好，提高退火温度试试。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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cgh20031695
2楼2013-06-20 21:15:51
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cgh20031695

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaodahe at 2013-06-20 21:15:51
你这是没扩增出来，或者特异性不好，提高退火温度试试。

谢谢，估计也是如此吧，实验太熬人了。
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3楼2013-06-21 14:13:56
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-29 20:09:02
cgh20031695: 金币+10, 重新提了RNA制得模板也不行，引物也换了，真是无语了。 2013-07-12 17:04:38
引物特异性不好。还有就是模板可能有污染。。建议这两方面改进
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4楼2013-06-21 14:34:16
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soarshining

捐助贵宾 (著名写手)
特异性不好，可能引物位置不合适，有时候一些特殊序列就是容易导致错配。曾经从质粒上扩目的基因构建融合蛋白载体，目的两头扩增出来，非常单一的条带，但是大小就是不对。后来酶切连接后送去测序，结果目的基因也在，但是末尾加了整整1000个碱基的错配序列，至今都不理解为什么会这样。
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5楼2020-04-07 21:52:05
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