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大风吹

银虫 (小有名气)

[求助] Elisa无结果

本人自己拿蛋白免疫大鼠 免疫两次以后Elisa检测无结果 板子上没有颜色变化
目的蛋白没问题 本人跑胶检测过
抗原包被0.1μg/孔 0.25  μg/孔都做过 血清从1:1000 1:2000 一直到1:64000
显色的时候用的是黄绿色的一个底物 半个小时也没变化
洗涤用千分之一PBST 封闭用5%脱脂牛奶的TBST  不知哪里可能出问题 敬请指教 多谢
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1楼 2013-06-15 14:45:25
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kx444555

至尊木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
抗原是重组蛋白还是多肽？
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星陈代谢
2楼2013-06-15 21:28:18
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大风吹

银虫 (小有名气)
GST融合表达蛋白
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3楼2013-06-17 08:45:31
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-18 12:12:24
大风吹: 金币+15, ★★★很有帮助 2013-06-20 09:23:28
鼠抗我也做过，刚才回复的全没了。晕
首先，楼主测的是IGE还是IGG，IGE效价上来没这么快，测的时候二抗稀释倍数稍微低点
其次，免疫两次，间隔时间多久啊
再次，建议你先做个方阵滴定，看看抗原包被浓度，二抗稀释倍数的最佳反应条件
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4楼2013-06-17 10:12:11
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上海伊丽萨

铁虫 (初入文坛)
你是用TMB显色么？我估计你要不就是TMB的成分加错顺序或者配错了
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5楼2013-06-18 11:36:32
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大风吹

银虫 (小有名气)
问题发现了 我在显色时少加双氧水了 感谢各位
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6楼2013-06-20 09:23:14
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