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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 高效液相条件摸索
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hongying1990

金虫 (小有名气)

[求助] 高效液相条件摸索

想请教一下懂液相的高手，如果要摸索液相条件，我该从哪些方面入手呢？不甚感激
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1楼 2013-06-05 16:54:28
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

hongying1990

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lifucheng at 2013-06-06 09:12:54
先看下分子结构 如果有羧基等极性基团的话 一般需要用缓冲盐 此外 如果用的是反相柱的话 两个峰分不开 在梯度中适当增加水相的比例

我是测植物油中的甘油三酯，成分比较复杂，流动相用的是乙腈和异丙醇，峰是分为几簇的，不知道怎么更好的把那几簇峰分开
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7楼2013-06-12 14:57:35
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
crity328: 金币+1, 感谢应助，欢迎常来~ 2013-06-06 09:34:29
首先搞清楚待测组分的物化性质(极性、溶解度、pH值、官能团分布），再选择合适的色谱柱和流动相在合适的检测波长（选择响应较高且吸收光谱曲线平缓区）下进行，先可以进行梯度洗脱找一个合适的配比。
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2楼2013-06-05 17:01:10
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hongying1990

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yugijiang at 2013-06-05 17:01:10
首先搞清楚待测组分的物化性质(极性、溶解度、pH值、官能团分布），再选择合适的色谱柱和流动相在合适的检测波长（选择响应较高且吸收光谱曲线平缓区）下进行，先可以进行梯度洗脱找一个合适的配比。

看了一些文献，色谱柱、流动相、检测器也差不多确定了，只是梯度不会调整，就是自己在瞎捉摸，有的时候把时间增加反而没有峰了
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3楼2013-06-05 18:50:17
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孤单过客

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
hongying1990: 金币+1, ★有帮助 2013-06-12 15:04:32
你的HPLC有用loading column 和analytical column吗？一般的文献都不讨论loading column，只讨论analytical column的条件，峰没有了，可以检查一下你的switching time是否合适。梯度一般从低浓度的有机溶剂开始试，逐渐增加，尤其要注意柱子的平衡，一定耐心一点。Good luck！
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4楼2013-06-06 01:15:17
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zhaolianhai

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
crity328: 金币+1, 感谢应助，欢迎常来~ 2013-06-06 09:34:56
hongying1990: 金币+2, ★有帮助 2013-06-12 14:58:39
先别着急进行实验，把待测物质的理化性质都弄清楚了，然后再选择合适的色谱柱和流动相，如果能再参考些文献就更好了，最后适当调整流动相比例，色谱柱类型，柱温等等。走梯度特别适合多种物质分离，二元不够可以三元，三元不够可以四元，梯度根据实际分离效果调整吧
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5楼2013-06-06 07:27:30
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lifucheng

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
crity328: 金币+1, 感谢应助，欢迎常来~ 2013-06-06 09:35:06
hongying1990: 金币+1, ★有帮助 2013-06-12 14:54:20
先看下分子结构 如果有羧基等极性基团的话 一般需要用缓冲盐 此外 如果用的是反相柱的话 两个峰分不开 在梯度中适当增加水相的比例
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6楼2013-06-06 09:12:54
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hongying1990

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhaolianhai at 2013-06-06 07:27:30
先别着急进行实验，把待测物质的理化性质都弄清楚了，然后再选择合适的色谱柱和流动相，如果能再参考些文献就更好了，最后适当调整流动相比例，色谱柱类型，柱温等等。走梯度特别适合多种物质分离，二元不够可以三元 ...

恩，谢谢~我觉得我的理论知识还不够扎实，可是又不知道从什么看起，还是有点急于求成了。
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8楼2013-06-12 15:04:00
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hongying1990

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 孤单过客 at 2013-06-06 01:15:17
你的HPLC有用loading column 和analytical column吗？一般的文献都不讨论loading column，只讨论analytical column的条件，峰没有了，可以检查一下你的switching time是否合适。梯度一般从低浓度的有机溶剂开始试， ...

我们实验室好像没有loading colum，看的文献都只有分析住的条件。我后来想了一下，可能是我没有将柱子平衡好，没冲干净
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9楼2013-06-12 15:08:23
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lixu19880714

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by hongying1990 at 2013-06-12 14:57:35
我是测植物油中的甘油三酯，成分比较复杂，流动相用的是乙腈和异丙醇，峰是分为几簇的，不知道怎么更好的把那几簇峰分开...

可以试试把乙腈的比例调大些因为异丙醇的洗脱能力比较强，测甘油三酯的英文文献比较多可以参考
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10楼2013-07-19 23:32:54
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