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如萤映雪

金虫 (小有名气)

[求助] 求助~有关 生物材料的 细胞毒性试验的问题。

我现在制备了一种组织工程的支架材料。(薄膜片状)
现在到了做细胞实验的环节。以前也没做过。
主要是做材料的细胞毒性试验。就是做MTT实验。
我想请教下下面的问题:
1.我已制备的薄膜片状材料应该怎么消毒?
2.做细胞毒性实验的时候是该用直接接触实验呢,还是浸提液实验呢?
3.细胞打算用BMSC,可以用直接接触实验把材料与细胞共培养做细胞毒性实验吗?
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爱狗的猫猫

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by tmiao at 2013-06-05 18:38:41
1.我已制备的薄膜片状材料应该怎么消毒?
75%乙醇清洗几次,然后无菌PBS清洗几次,然后又用培养基润洗,后几次都在无菌环境下进行
2.做细胞毒性实验的时候是该用直接接触实验呢,还是浸提液实验呢?
细胞和支架培 ...

MTT怎么做呢,把每组细胞全都消化下来然后铺板吗??是不是不用记数了全部铺上去,等黏附了加MTT呢??还是直接加MTT就行呢??
10楼2014-03-12 20:57:45
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yingxiongz

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
红舟流星: 金币+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-06-04 23:35:39
这个要看类似的文献报道,不同的细胞,不同的培养条件都不是完全相同。要看你的体系,最好引用高影响因子的类似文章,到时把他们做的试样支架换成你们的就可以。非生物专业比较难操作,我们是跟生院合作,交钱让他们培养,我们看文献提出相关方案,具体操作时他们做的
镁合金生物材料
2楼2013-06-04 11:35:48
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Jackcd12

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
红舟流星: 金币+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-06-04 23:35:44
对固体支架材料的细胞相容性和毒性试验一般都采用MTT试验,在高压釜中灭菌;将你的bMSCs直接接种到材料表面,要注意的是你的样品原片尺寸最好与培养板孔的内径相当,以免在接种和培养过程中很多细胞转移到培养板底部去了。
Themoreamanlearns,themoreheknowshisignorance!
3楼2013-06-04 11:48:41
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longlotian

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
红舟流星: 金币+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-06-04 23:35:50
有国标的,医疗器械生物学评价第5部分:体外细胞毒性试验,可参考。
灭菌一般高压灭菌吧;
直接接触法和浸提液法,都可以,个人感觉浸提液法方便点。直接接触法要根据细胞培养板剪裁材料,最多只能用24孔板,96孔板那孔就太小了,阳性对照的PVC膜片做着也不太好做吧。
Electrospinning of carboxymethyl chitin/poly(vinyl alcohol) nanofibrous scaffolds for tissue engineering applications这篇文献中有MTT assay,就是最后不是用的DMSO,你可以再找找别的文献看。
4楼2013-06-04 18:46:17
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