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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zcf1990 at 2013-06-04 17:21:47
对了，我做的是HPPD，来源是拟南芥的。...

奥 植物蛋白原核表达啊 可能就是不太好做吧
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11楼2013-06-04 22:09:57
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-05 11:45:35
大肠杆菌里表达外源蛋白时，在15-25度是一般都会是可溶的，37度高温诱导都是包涵体，按文献37度诱导做上清的我们还真没接触过，我们实验室一个月也做不少可溶蛋白都是低温诱导的，要不楼主试试包涵体
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12楼2013-06-05 08:30:18
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
文献上也是使用的pET载体原核系统来表达的吗？
感觉大肠杆菌来表达植物蛋白的成功率不高。
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小兵一个
13楼2013-06-05 09:27:01
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anning529

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
14楼2013-11-26 16:30:17
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葳蕤小小

新虫 (初入文坛)
我也是纯化一个结合二价铁离子的蛋白，pET载体，his标签，浓度也很高，就是透析完后做EMSA一直没有活性。。。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

小河虾
15楼2014-10-17 15:51:57
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21307008

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 葳蕤小小 at 2014-10-17 15:51:57
我也是纯化一个结合二价铁离子的蛋白，pET载体，his标签，浓度也很高，就是透析完后做EMSA一直没有活性。。。

那你怎么改进的，现在EMSA 做出来了吗，急需，谢谢！
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16楼2014-12-29 21:59:44
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小河虾

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by 葳蕤小小 at 2014-10-17 15:51:57
我也是纯化一个结合二价铁离子的蛋白，pET载体，his标签，浓度也很高，就是透析完后做EMSA一直没有活性。。。

你好，后来有活性了吗？
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God helps the man who helps himself
17楼2015-06-02 09:08:51
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liubx1006

银虫 (小有名气)
脱盐试下吧，有时纯化蛋白用的缓冲盐浓度太高会影响酶活的
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18楼2015-07-03 18:10:20
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