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songzuowei

木虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by zcf1990 at 2013-06-04 17:21:47
对了,我做的是HPPD,来源是拟南芥的。...

奥 植物蛋白原核表达啊 可能就是不太好做吧
11楼2013-06-04 22:09:57
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-05 11:45:35
大肠杆菌里表达外源蛋白时,在15-25度是一般都会是可溶的,37度高温诱导都是包涵体,按文献37度诱导做上清的我们还真没接触过,我们实验室一个月也做不少可溶蛋白都是低温诱导的,要不楼主试试包涵体
12楼2013-06-05 08:30:18
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
文献上也是使用的pET载体原核系统来表达的吗?
感觉大肠杆菌来表达植物蛋白的成功率不高。
小兵一个
13楼2013-06-05 09:27:01
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anning529

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

14楼2013-11-26 16:30:17
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葳蕤小小

新虫 (初入文坛)

我也是纯化一个结合二价铁离子的蛋白,pET载体,his标签,浓度也很高,就是透析完后做EMSA一直没有活性。。。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

15楼2014-10-17 15:51:57
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21307008

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by 葳蕤小小 at 2014-10-17 15:51:57
我也是纯化一个结合二价铁离子的蛋白,pET载体,his标签,浓度也很高,就是透析完后做EMSA一直没有活性。。。

那你怎么改进的,现在EMSA 做出来了吗,急需,谢谢!
16楼2014-12-29 21:59:44
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小河虾

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
15楼: Originally posted by 葳蕤小小 at 2014-10-17 15:51:57
我也是纯化一个结合二价铁离子的蛋白,pET载体,his标签,浓度也很高,就是透析完后做EMSA一直没有活性。。。

你好,后来有活性了吗?
God helps the man who helps himself
17楼2015-06-02 09:08:51
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liubx1006

银虫 (小有名气)

脱盐试下吧,有时纯化蛋白用的缓冲盐浓度太高会影响酶活的
18楼2015-07-03 18:10:20
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