【答案】应助回帖

11楼2013-06-04 22:09:57

chlorella409

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【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-05 11:45:35

大肠杆菌里表达外源蛋白时，在15-25度是一般都会是可溶的，37度高温诱导都是包涵体，按文献37度诱导做上清的我们还真没接触过，我们实验室一个月也做不少可溶蛋白都是低温诱导的，要不楼主试试包涵体

12楼2013-06-05 08:30:18

linxt2005

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

文献上也是使用的pET载体原核系统来表达的吗？
感觉大肠杆菌来表达植物蛋白的成功率不高。

小兵一个

13楼2013-06-05 09:27:01

anning529

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14楼2013-11-26 16:30:17

葳蕤小小

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我也是纯化一个结合二价铁离子的蛋白，pET载体，his标签，浓度也很高，就是透析完后做EMSA一直没有活性。。。

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小河虾

15楼2014-10-17 15:51:57

21307008

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引用回帖:

15楼: Originally posted by 葳蕤小小 at 2014-10-17 15:51:57
我也是纯化一个结合二价铁离子的蛋白，pET载体，his标签，浓度也很高，就是透析完后做EMSA一直没有活性。。。

那你怎么改进的，现在EMSA 做出来了吗，急需，谢谢！

16楼2014-12-29 21:59:44

小河虾

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引用回帖:

你好，后来有活性了吗？

God helps the man who helps himself

17楼2015-06-02 09:08:51

liubx1006

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脱盐试下吧，有时纯化蛋白用的缓冲盐浓度太高会影响酶活的

18楼2015-07-03 18:10:20