24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 3821  |  回复: 17
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

zcf1990

银虫 (初入文坛)

[求助] 请教:我的蛋白表达出来了,可溶,但为什么大部分都是没有活性的?

请教两个问题:我的蛋白是pEt系统的,带his标签,表达出来了在上清,也纯化出来了,目的蛋白浓度很高,但活性很差(当然表达条件我已经优化了:37度过夜),我就怀疑是不是表达出来的目的蛋白部分(应该是大部分,不是全部)失活了。我想请教的是,可能是哪些原因造成我的蛋白部分失活以及怎样改进呢?希望大家能帮我,谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
文献上也是使用的pET载体原核系统来表达的吗?
感觉大肠杆菌来表达植物蛋白的成功率不高。
小兵一个
13楼2013-06-05 09:27:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

tigertang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zcf1990: 金币+1, 有帮助 2013-06-03 15:24:51
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-06-03 18:20:42
如果你的蛋白是真核生物来源的话,可能翻译后修饰或折叠对活性很重要,可以试试毕赤酵母或昆虫细胞等真核表达系统。
2楼2013-06-03 14:04:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yanfang2012

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zcf1990: 金币+1, 有帮助 2013-06-03 15:25:07
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2013-06-03 18:20:54
我的也是pET系统,带His标签,是原核蛋白,表达时用的25℃,还有你的蛋白会不会因为表达时被其他酶催化分解呢?所以你要注意温度,表达时有些操作要在冰上进行
believe yourself!
3楼2013-06-03 14:43:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
zcf1990(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-06-05 11:45:13
你做的蛋白是否需要结合一定的辅助因子才有活性?
4楼2013-06-04 01:45:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-03 07:22 by jmr1kibhvw
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qs8kylt1wr 2026-05-01 4/200 2026-05-03 07:19 by jmr1kibhvw
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 3/150 2026-05-03 05:52 by w5idbsc3mz
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 05:49 by w5idbsc3mz
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 04:34 by w5idbsc3mz
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 04:19 by w5idbsc3mz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:51 by w5idbsc3mz
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 d8tbypao1q 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:49 by w5idbsc3mz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:19 by w5idbsc3mz
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 03:04 by w5idbsc3mz
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 02:36 by w5idbsc3mz
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 02:06 by w5idbsc3mz
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 k17zww5nna 2026-05-01 4/200 2026-05-03 01:34 by w5idbsc3mz
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qs8kylt1wr 2026-05-01 4/200 2026-05-03 00:00 by 火炎焱燚炙烤
[论文投稿] 有人投过CCC中国控制会议吗? 19+3 初九凡 2026-04-26 4/200 2026-05-02 21:11 by Equinoxhua
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.5.5.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qs8kylt1wr 2026-05-01 3/150 2026-05-02 15:51 by zahslv263y
[有机交流] 一个化合物的合成路线:CAS:367929-02-0 名称:8β-乙烯基雌二醇 50+4 zhquanbing 2026-04-28 4/200 2026-04-30 22:45 by zyqchem
[文学芳草园] 太白金星有点烦 +3 yexuqing 2026-04-27 3/150 2026-04-30 21:56 by myrtle
[考博] 中国地质大学(北京)博士招生补录,数理学院材料科学与工程专业和材料与化工专业 +3 liuxh329 2026-04-29 3/150 2026-04-30 15:42 by 顺利毕业zs
[论文投稿] 有没有快的中文核心比较快录用的,纳米材料光催化 5+3 2914439618 2026-04-27 4/200 2026-04-29 08:59 by 北京莱茵润色
信息提示
请填处理意见