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zcf1990

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 550.5
散金: 30
帖子: 24
在线: 8.2小时
虫号: 2114416
注册: 2012-11-08
专业: 生物化学

[求助] 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?

请教两个问题：我的蛋白是pEt系统的，带his标签，表达出来了在上清，也纯化出来了，目的蛋白浓度很高，但活性很差（当然表达条件我已经优化了：37度过夜），我就怀疑是不是表达出来的目的蛋白部分（应该是大部分，不是全部）失活了。我想请教的是，可能是哪些原因造成我的蛋白部分失活以及怎样改进呢？希望大家能帮我，谢谢！

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1楼2013-06-03 10:40:22

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liubx1006

银虫 (小有名气)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 241.1
散金: 18
帖子: 58
在线: 27.8小时
虫号: 1076222
注册: 2010-08-17
专业: 生物大分子结构与功能

脱盐试下吧，有时纯化蛋白用的缓冲盐浓度太高会影响酶活的

18楼2015-07-03 18:10:20

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