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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?
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zcf1990

银虫 (初入文坛)

[求助] 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?

请教两个问题：我的蛋白是pEt系统的，带his标签，表达出来了在上清，也纯化出来了，目的蛋白浓度很高，但活性很差（当然表达条件我已经优化了：37度过夜），我就怀疑是不是表达出来的目的蛋白部分（应该是大部分，不是全部）失活了。我想请教的是，可能是哪些原因造成我的蛋白部分失活以及怎样改进呢？希望大家能帮我，谢谢！
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1楼2013-06-03 10:40:22
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songzuowei

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zcf1990(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-05 11:45:24
你是怎么检测你的蛋白活性的啊？按理说不会出现这种情况 还有你的是什么蛋白啊 你要是用western检测的话 western做不出条带原因很多 不能说明你蛋白失活
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6楼2013-06-04 13:41:55
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songzuowei

木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zcf1990 at 2013-06-04 17:21:47
对了，我做的是HPPD，来源是拟南芥的。...

奥 植物蛋白原核表达啊 可能就是不太好做吧
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11楼2013-06-04 22:09:57
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