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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?
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zcf1990

银虫 (初入文坛)

[求助] 请教：我的蛋白表达出来了，可溶，但为什么大部分都是没有活性的?

请教两个问题：我的蛋白是pEt系统的，带his标签，表达出来了在上清，也纯化出来了，目的蛋白浓度很高，但活性很差（当然表达条件我已经优化了：37度过夜），我就怀疑是不是表达出来的目的蛋白部分（应该是大部分，不是全部）失活了。我想请教的是，可能是哪些原因造成我的蛋白部分失活以及怎样改进呢？希望大家能帮我，谢谢！
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1楼2013-06-03 10:40:22
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
zcf1990(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-05 11:45:18
诱导温度太高了，蛋白失活了。15-25度合适。
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5楼2013-06-04 08:46:12
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-05 11:45:35
大肠杆菌里表达外源蛋白时，在15-25度是一般都会是可溶的，37度高温诱导都是包涵体，按文献37度诱导做上清的我们还真没接触过，我们实验室一个月也做不少可溶蛋白都是低温诱导的，要不楼主试试包涵体
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12楼2013-06-05 08:30:18
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