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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取时加入乙醇dna不沉淀
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776142

金虫 (正式写手)

[交流] 质粒提取时加入乙醇dna不沉淀

在使用自己合成的DNA提取材料提取DNA的时候，用1M的NaCl进行的洗脱，然后用2倍体积的预冷的无水乙醇对DNA进行沉淀，发现没有沉淀，测混合液的紫外也是DNA仍在溶液中，不知道为什么，希望有懂的同学帮忙回答下
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1楼2013-06-01 18:55:57
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

776142

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 木笑子 at 2013-06-04 10:45:50
加入十分之一体积的3M 醋酸钠 pH5.3，或者糖原，可以提高DNA 回收率。

谢谢  额外加了  可以沉淀下来
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15楼2013-06-06 08:08:10
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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)
祝福祝福祝福祝福祝福祝福！
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2楼2013-06-01 19:25:49
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
776142: 金币+2 2013-06-01 21:16:07
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-06-01 21:30:55
加入1M的NaC和2倍体积的预冷的无水乙醇，要颠倒混匀，-20度静止20min，高速离心，就可沉淀DNA
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3楼2013-06-01 19:57:46
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
776142: 金币+2 2013-06-01 21:16:01
776142: 金币+2 2013-06-02 16:02:31
你用乙醇处理后有离心吗？没离心的话DNA自己沉不下来的哦。一般用12,000转离心10分钟。
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4楼2013-06-01 20:38:02
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776142

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liygmail at 2013-06-01 19:57:46
加入1M的NaC和2倍体积的预冷的无水乙醇，要颠倒混匀，-20度静止20min，高速离心，就可沉淀DNA

这些都做了 还是不行 都在乙醇跟水的混合液中
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5楼2013-06-01 21:15:39
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776142

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西瓜 at 2013-06-01 20:38:02
你用乙醇处理后有离心吗？没离心的话DNA自己沉不下来的哦。一般用12,000转离心10分钟。

离心了  12000g 10分钟
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6楼2013-06-01 21:15:56
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
776142: 金币+1 2013-06-02 16:02:41
会不会是你的乙醇量不够！
算下来才66%！
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7楼2013-06-01 23:02:58
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lsht

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是乙醇不够。乙醇浓度是100%吗？啥材料，用1M NaCl洗？高盐不是使DNA不宜溶解吗？
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8楼2013-06-02 09:09:35
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776142

金虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lsht at 2013-06-02 09:09:35
可能是乙醇不够。乙醇浓度是100%吗？啥材料，用1M NaCl洗？高盐不是使DNA不宜溶解吗？

别的洗不下来  只能用氯化钠
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9楼2013-06-02 15:59:26
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776142

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yxncas-2012 at 2013-06-01 23:02:58
会不会是你的乙醇量不够！
算下来才66%！

正常可以的    一般都是这么做的
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10楼2013-06-02 15:59:42
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木笑子

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
776142: 金币+5 2013-06-06 08:07:26
776142: 金币+3 2013-06-06 15:22:29
加入十分之一体积的3M 醋酸钠 pH5.3，或者糖原，可以提高DNA 回收率。
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11楼2013-06-04 10:45:50
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jiabei6131

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你提取的是什么的DNA
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12楼2013-06-04 12:32:59
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chlorella409

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
776142: 金币+5 2013-06-06 08:07:37
溶液中盐太多了，电荷影响了DNA的沉淀，一般只加入1/10的PH5.2的乙酸钠
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14楼2013-06-04 14:26:10
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776142

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by chlorella409 at 2013-06-04 14:26:10
溶液中盐太多了，电荷影响了DNA的沉淀，一般只加入1/10的PH5.2的乙酸钠

加乙醇就是为了除盐，额外加了乙酸钠，能沉淀下来，谢谢
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16楼2013-06-06 08:08:49
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ndfgxhnyq13楼
2013-06-04 12:51   回复  
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