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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » SDS_PAGE酶谱有问题，请指教
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elanwong

新虫 (初入文坛)

[求助] SDS_PAGE酶谱有问题，请指教

问题描述：这两张图片是SDS_PAGE酶谱图，图2是经过刚果红染色后正常状态（就是下边分离胶颜色深，上边浓缩胶部分应该颜色很浅），但是在后来做酶谱时，刚果红染色 后，加木聚糖底物的分离胶不能染上颜色，而不加底物的浓缩胶颜色却很深，如图1（PS：扫描后的图片颜色有点失真，下边分离胶颜色其实没有那么红），这到底是为什么呀？请高人指点~~
SDS_PAGE酶谱有问题，请指教
图1.jpg


SDS_PAGE酶谱有问题，请指教-1
图2.jpg
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1楼 2013-05-29 19:23:32
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elanwong

新虫 (初入文坛)
wizardfan: 以后请在试验后再对应助做出评价，以方便木虫交流 2013-06-05 07:53:36
引用回帖:
4楼: Originally posted by lizhijiang at 2013-06-02 21:20:54
我做过很多蛋白酶的酶谱，如果不出现亮带，和底物浓度有很大关系。我是在胶中加入0.5mg/ml的底物浓度。另外，Triton洗涤脱去SDS和孵育也很关键。电泳时尽量于冰浴上进行。样品不加热。尽量保持原酶活性。

谢谢，我试试~
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5楼2013-06-04 21:13:46
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elanwong

新虫 (初入文坛)
求大神，快出没呀~~~~~~~~
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2楼2013-05-31 09:08:24
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elanwong

新虫 (初入文坛)
怎么虫友都跑去过节了吗？求帮助啊
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3楼2013-06-01 20:11:44
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lizhijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
elanwong: 金币+10 2013-06-04 21:14:04
我做过很多蛋白酶的酶谱，如果不出现亮带，和底物浓度有很大关系。我是在胶中加入0.5mg/ml的底物浓度。另外，Triton洗涤脱去SDS和孵育也很关键。电泳时尽量于冰浴上进行。样品不加热。尽量保持原酶活性。
赞一下(1人) 回复此楼
海上生明月，天涯共此时！
4楼2013-06-02 21:20:54
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