| 查看: 1470 | 回复: 7 | ||
[求助]
这算是包涵体吗？
|
|
这个问题是困扰我好长时间了。我构建了一个重组菌，全细胞活性很高，但是在破碎这一步，怎么也破不出来，沉淀里目标蛋白很多，上清很少，曾怀疑过是包涵体，但是破碎后沉淀还是有很高的活性（用200w功率破时，比上清的活性高）。 我做的尝试： 1我试过改变破碎条件，增加功率和破碎时间。当增加到400w时，上清活性上去了（比全细胞活性差远了），沉淀活性低了，但是蛋白电泳显示沉淀里的蛋白还是特别多，上清少。这是怎么回事啊？是包涵体吗？ 2.怀疑是包涵体，所以试着改变诱导条件，降低IPTG浓度，甚至用乳糖诱导，降低诱导温度，但是还是这样，破碎液很白，不透明，蛋白电泳结果也是这样。但是我用未诱导的重组菌做对比，发现破碎液透亮了。 请问，这一系列的实验，能说明是包涵体吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有77人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 这组峰应该算是什么峰，怎样解析
已经有7人回复
- 博士毕业签工作这种算是调动吗？
已经有4人回复
- 写一写我这几年来的申请过程,算是还愿
已经有36人回复
- 这个导师的回复不算是拒绝吧，可以再发邮件吗？
已经有4人回复
- 不同版本vasp 计算相同的超胞的能量 差了几十个meV 这算是合理或者是有问题？
已经有10人回复
- 求助一篇英文，我也不知道这个算是文献还是说明书
已经有7人回复
- 美国大学专业排名前多少，这个学校这个专业算是很厉害的？
已经有7人回复
- 类似这样的工作，算是数据挖掘吗？会使用到什么样的挖掘算法？
已经有9人回复
- 这算是接收吗？can be accepted for publication after ……
已经有22人回复
- 谁给看看，这封信算是接收函吗？
已经有26人回复
- PRB这样的审稿意见算是大修还是小修？
已经有6人回复
- 请问这样的XRD图谱算是非晶还是什么
已经有12人回复
- 这个算是什么结构啊？
已经有7人回复
- 我这篇论文算是被Elsevier英文期刊录用了吗？ 录用通知在哪里下载？？？？
已经有13人回复
- 一篇稿子SCI在审，打算修改一下投EI会议。请问这样算是一稿多投吗？
已经有24人回复
- 这种外文期刊属于什么级别，算是什么收录？
已经有5人回复
- 【讨论】这个算是offer么，看了邮件标题是，邮件内容又不像
已经有4人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极热心应助，欢迎热心虫虫 2013-05-28 08:25:47
hraikeyan: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-05-30 16:37:35
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励积极热心应助，欢迎热心虫虫 2013-05-28 08:25:47
hraikeyan: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-05-30 16:37:35
|
我觉得应该是包涵体。未诱导的菌超声能破，说明超声程序是没问题的。当然，不排除诱导后的菌体不如为诱导的好破。你的上清和沉淀跑电泳，并不能说明蛋白在上清和包涵体里面的比例。因为存在一个破损率的问题。未破的菌体用SDS上样缓冲液处理后会破碎。你应该在超声前取一定体积的菌体。用上样BUFFER直接破碎菌体得全菌蛋白。然后用超声后同样体积的上清跑可溶蛋白。再比较目的蛋白在上清和全菌蛋白中的比例。 如果你已经尝试了改变诱导条件，效果都不理想，你可以试试直接纯化包涵体后复性。如果能获得活性蛋白，就不用纠结是在上清里还是沉淀里的问题了。 |
2楼2013-05-28 08:17:36
3楼2013-05-29 15:35:48
4楼2013-05-30 15:57:59
kedaxiaoyu
木虫 (职业作家)
神虫浮云
- 应助: 84 (初中生)
- 金币: 4809.5
- 散金: 776
- 红花: 19
- 沙发: 110
- 帖子: 3858
- 在线: 2108.7小时
- 虫号: 1675631
- 注册: 2012-03-08
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
5楼2013-05-30 16:28:20
6楼2013-05-30 16:37:15
whb21
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 105 (高中生)
- 金币: 9711.3
- 散金: 625
- 红花: 7
- 帖子: 2994
- 在线: 172.4小时
- 虫号: 928584
- 注册: 2009-12-15
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
7楼2013-05-30 16:42:23
kedaxiaoyu
木虫 (职业作家)
神虫浮云
- 应助: 84 (初中生)
- 金币: 4809.5
- 散金: 776
- 红花: 19
- 沙发: 110
- 帖子: 3858
- 在线: 2108.7小时
- 虫号: 1675631
- 注册: 2012-03-08
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
8楼2013-05-31 07:56:41
40