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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 这算是包涵体吗？
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hraikeyan

金虫 (小有名气)

[求助] 这算是包涵体吗？

这个问题是困扰我好长时间了。我构建了一个重组菌，全细胞活性很高，但是在破碎这一步，怎么也破不出来，沉淀里目标蛋白很多，上清很少，曾怀疑过是包涵体，但是破碎后沉淀还是有很高的活性（用200w功率破时，比上清的活性高）。
我做的尝试：
1我试过改变破碎条件，增加功率和破碎时间。当增加到400w时，上清活性上去了（比全细胞活性差远了），沉淀活性低了，但是蛋白电泳显示沉淀里的蛋白还是特别多，上清少。这是怎么回事啊？是包涵体吗？
2.怀疑是包涵体，所以试着改变诱导条件，降低IPTG浓度，甚至用乳糖诱导，降低诱导温度，但是还是这样，破碎液很白，不透明，蛋白电泳结果也是这样。但是我用未诱导的重组菌做对比，发现破碎液透亮了。
请问，这一系列的实验，能说明是包涵体吗？
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nothing isimpossible
1楼 2013-05-27 23:07:27
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whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
应该是包涵体，建议楼主试试包涵体变性复性，换一个表达系统试试
赞一下 回复此楼
7楼2013-05-30 16:42:23
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