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louveffy

新虫 (初入文坛)

[求助] PITC法测氨基酸 已有1人参与

用PITC测定标准品L-苏氨酸,衍生效果一直不好,没有出现物质峰,而且后面杂质峰特别多,不知道怎么回事,在此请教一下各位,如果你们有好的方法,麻烦发我邮箱下,谢啦!1515419055@qq.com。
      溶液配制:用0.1mol/L盐酸配制500mg/L L-苏氨酸;用乙腈配制4.2g/L的PITC
      测定步骤:取200uL L-苏氨酸置于1.5mL进样瓶中,再加入100uLPITC,混匀,在30℃水浴下反应1小时,然后取400uL正己烷加入,震荡充分后,静置分层,取200uL下清液,接着再取800uL纯水,最后用0.22um针式过滤器过滤,将滤液转入1.5mL进样瓶中,进样分析。
      色谱条件:1.HC-C18  4.6*250mm
                        2.波长:254nm;柱温:38℃;流速:1mL/min
                        3.流动相A:0.1mol/L乙酸钠+乙腈=97:3
                           流动相B:乙腈+水=4+1
      梯度      时间       A         B
                    0         100       0
                  13          93        7
                  23          77       23
                  29          65       35
                  35          60       40
                  40           0       100
                  45           0       100
                  50           60      40
                  60           77      23
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PITC法测氨基酸
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超然依艳

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

取200uL L-苏氨酸置于1.5mL进样瓶中,先加入100ul三乙胺乙腈溶液(1mol/L)再加入100uLPITC,混匀。衍生需要碱性环境下进行
2楼2018-12-06 21:25:14
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