| 查看: 1550 | 回复: 23 | |||
[求助]
包涵体复性
|
|||
|
最近做两个蛋白，复性的时候遇到问题，换了好几个复性条件，结果总是在2MU的时候完全沉淀。上次做出来了用的复性Buffer为20mMTris，0.015%SDS，1mMEDTA和分别的2MU、1MU、0MU 首先是进行稀释1倍（用枪逐滴加入），然后分别依次透析 今天重复做，不知道为什么总是在稀释复性的时候就沉淀了，为什么 请大家指教 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有284人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
-
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
10楼2013-05-24 14:59:39
2楼2013-05-23 14:32:12
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
475502411: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-05-24 09:19:52
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-03 13:45:59
感谢参与，应助指数 +1
475502411: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-05-24 09:19:52
myprayer: 金币+2, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-03 13:45:59
|
并不是所有的蛋白都可以稀释复性。 有一些蛋白分子无法越过中间态而转向于聚集沉淀，这是正常的。通常透析时浓度在0.1一下，可以加入0.5M arg抑制分子聚集，进而使复性向正确折叠的方向移动。 你的蛋白天然状态有没有二硫键呢？这个你要确定，因为有二硫键的话你要用氧化还原体系来形成正确的链内二硫键。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4755024113楼2013-05-24 08:21:00
4楼2013-05-24 09:19:33
生物小通
木虫 (正式写手)
- 应助: 29 (小学生)
- 金币: 1298.3
- 散金: 1069
- 红花: 5
- 帖子: 774
- 在线: 335.3小时
- 虫号: 1537514
- 注册: 2011-12-14
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤复发与转移
5楼2013-05-24 09:42:52
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
475502411: 金币+8, ★★★很有帮助 2013-05-30 11:51:27
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-03 13:47:59
475502411: 金币+8, ★★★很有帮助 2013-05-30 11:51:27
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-03 13:47:59
|
有七个二硫键，在之前透析的时候如果没有还原性-sh存在，你的蛋白很容易聚集沉淀。 建议：在>2m尿素之前的透析中加入2mm dtt防止聚集形成多聚体。而你破碎溶解包涵体的时候更要加。 在2m尿素的时候，蛋白浓度调到0.2mg/ml左右，透析到含有10mm GSh,1mm gssg（也叫gssh）中，4度过夜。然后再透析到更低浓度的尿素中。谢谢。 |
6楼2013-05-24 10:00:16
7楼2013-05-24 11:16:57
8楼2013-05-24 11:22:59
9楼2013-05-24 14:34:38
