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包涵体复性
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最近做两个蛋白，复性的时候遇到问题，换了好几个复性条件，结果总是在2MU的时候完全沉淀。上次做出来了用的复性Buffer为20mMTris，0.015%SDS，1mMEDTA和分别的2MU、1MU、0MU 首先是进行稀释1倍（用枪逐滴加入），然后分别依次透析 今天重复做，不知道为什么总是在稀释复性的时候就沉淀了，为什么 请大家指教 |
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【答案】应助回帖
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475502411: 金币+8, ★★★很有帮助 2013-05-30 11:51:27
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-03 13:47:59
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有七个二硫键，在之前透析的时候如果没有还原性-sh存在，你的蛋白很容易聚集沉淀。 建议：在>2m尿素之前的透析中加入2mm dtt防止聚集形成多聚体。而你破碎溶解包涵体的时候更要加。 在2m尿素的时候，蛋白浓度调到0.2mg/ml左右，透析到含有10mm GSh,1mm gssg（也叫gssh）中，4度过夜。然后再透析到更低浓度的尿素中。谢谢。 |
6楼2013-05-24 10:00:16
2楼2013-05-23 14:32:12
【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
475502411: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-05-24 09:19:52
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并不是所有的蛋白都可以稀释复性。 有一些蛋白分子无法越过中间态而转向于聚集沉淀，这是正常的。通常透析时浓度在0.1一下，可以加入0.5M arg抑制分子聚集，进而使复性向正确折叠的方向移动。 你的蛋白天然状态有没有二硫键呢？这个你要确定，因为有二硫键的话你要用氧化还原体系来形成正确的链内二硫键。 |
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4755024113楼2013-05-24 08:21:00
4楼2013-05-24 09:19:33
